細(xì)胞株名稱：A549/DDP 人肺癌順鉑耐藥株

種屬：人組織來源：肺癌

生長特性：貼壁生長形態(tài)特征：上皮細(xì)胞

微生物及支原體檢測：陰性

安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養(yǎng)條件：    *培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+2000ng/ml DDP
    血清我們推薦用:
    GIBCOFBS-10099-141 或 HYCLONEFBS-SH30084.03,。
    培養(yǎng)條件：37.0C   carbon dioxide(CO2),5%A549/DDP 人肺癌順鉑耐藥株

傳代方法：    收到細(xì)胞后,，在倒置鏡下(是在 4X 物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況。
    （一）如果細(xì)胞未長滿,，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，吸出培養(yǎng)液,，換 10ml 新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
    (二)如果細(xì)胞已長滿,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。具體步驟如下：
    1. 棄去培養(yǎng)液，用 PBS（不含鈣,鎂離子）洗 1-2 次,。
    2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，倒放于37℃培養(yǎng)箱 1-3 分鐘預(yù)熱，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶 10-30 秒,，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化,。
    3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中,。如果沒有特別說明,，收到細(xì)胞后的*次傳代一般是一傳二。
    注：1,、觀察細(xì)胞在低倍鏡（4 或 5X 物鏡)下進(jìn)行,，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請在 10X 或 20X 物鏡下,。
    2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素,。A549/DDP 人肺癌順鉑耐藥株
    3、有些細(xì)胞貼壁不牢,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。
    4,、收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請及時與我們,。..

凍存方法：    凍存液：90%胎牛血清，10%DMSO
    儲存：液氮儲存