40510ES Collagenase IV膠原酶IV型
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 40510ES
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/4/27 13:21:04
- 訪問次數(shù) 1750
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 40510ES |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
Collagenase IV膠原酶IV型
膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,,一種肽鏈內(nèi)切酶,能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中,,很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘|氨酸(Gly)之間的肽鍵,。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽,但膠原酶是*一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶,,這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi),。
本品來源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),是一種酶粗提物,,不僅含有膠原酶(更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),,能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶,,多糖酶,,脂酶等,,分別能夠有效水解
結(jié)締組織和上皮組織細胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì),,使得本品非常適用于組織消化,。
目前商業(yè)化提供的細菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異,分為四種類型:膠原酶I型,,II型,,III型和IV型,在應(yīng)用上有所偏向:1)膠原酶I(Type I Collagenase):含有比較均勻的各種酶活力(包括膠原酶,,酪蛋白酶,,梭菌蛋白酶,胰蛋|白酶活性),。通常用作上皮細胞,、肝、肺,、脂肪和腎上腺組織細胞的制備,;2)膠原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心臟,、骨,、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細胞的制備,;3)膠原酶III(Type III Collagenase):含有較低的蛋白酶活性,,常用于乳腺細胞的制備;4)膠原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰|酶活性,,通常用于胰島細胞的制備,,或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。
本品為IV型膠原酶,,≥125 CDU/mg solid(CDU = collagen digestion units),,特別適用于胰島組織的消化。
酶活力單位定義
在37℃,,pH7.5 的條件下,,5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1µM L-亮|氨酸的酶量定義為1個酶活力單位。
運輸和保存方法
室溫運輸,。4℃避光保存,,2年有效。儲存液-20℃避光凍存,。
注意事項
為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 膠原酶儲存液的配制
向每管100mg的膠原酶中加入100µL的含Ca2+,、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡|鹽溶液,,含Ca2+,、Mg2+),輕輕旋渦震蕩使其充分溶解,,制備成1g/ml(即1000×)的儲存液,。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌,分裝成小份量,,然后于-20℃避光凍存。
使用前于冰上解凍,,避免反復(fù)凍融,。其用于組織和細胞分散的常用濃度為:0.5-2.5mg/ml,用于軟骨消化的常用濃度為1-2mg/ml,,需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應(yīng)的文獻資料確定所需的*工作濃度,。
2.組織的分離
1)使用無菌手術(shù)|刀或剪刀將組織切成3-4mm大小的組織塊;
2)利用含Ca2+,、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次,;
3)加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS,,使其浸沒組織塊,,并加入膠原酶至需要工作濃度;
4)于37℃孵育4-18h,。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補充消化可以提高消化效率,。
5) 已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得,收集備用,。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育,;
6)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次;
7)細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞,,利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度,。
8)于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞。
3. 器官灌注
1)向37℃預(yù)熱的含Ca2+,、Mg2+的HBSS中加入膠原酶,,另添加3mM的CaCl2有助于提高分離效率;
2)按照已優(yōu)化的速率對相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液,;
3)將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩,,從而將已解離的細胞或小片段組織塊與較大團塊分離開來,未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進一步孵育,;
4)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次,;
5)細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞,利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度,。
6)于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞,。
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