40101ES Trypsin 1:2501:250(粉末)
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 BioAssay Systems
- 型號 40101ES
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/2/7 13:36:30
- 訪問次數(shù) 296
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
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產(chǎn)品描述
(Trypsin)是一種普遍發(fā)現(xiàn)于脊椎動物消化系統(tǒng)的蛋白酶,能水解蛋白,,以無活性的原(trypsinogen)的形式分泌于胰腺中,。其切割肽鏈的位點主要位于或的羧基端(二者緊接的情況除外)。包括兩個亞基,,α亞基(有2個多肽鏈構(gòu)成)和β亞基(有1個多肽鏈構(gòu)成),。其水解活性可被多種抑制劑抑制,包括:1)有機磷化合物,,如氟磷酸異丙酯,;2)來源于胰腺、大豆,、青豆,、蛋清的天然抑制劑;3)銀離子,;4)特定蛋白酶抑制劑,,如AEBSF、DFP,、PMSF,、TLCK等;
本品是來源于的凍干粉,,經(jīng)γ射線處理滅活病毒,,酶活≥ 250 units/mg。廣泛用于細胞傳代,,將貼壁細胞從培養(yǎng)板上消化水解下來制備單細胞懸液,常用的工作濃度是0.25-5%(w/v),。
產(chǎn)品性質(zhì)
中文別名(Chinese synonym) | ,,豬胰臟來源; |
英文別名(English synonym) | Trypsin, porcine pancreas; Parenzyme; Tryptar; Trypure; Parenzymol; U-4858; |
CAS號(CAS NO.) | 9002-07-7 |
分子量(Molecular weight) | 23.8 kDa |
外觀(Apperance) | 白色至類白色粉末 |
消光系數(shù)(Extinction coefficient) | E1%280=14.3 |
等電點(Isoelectric Point) | pH 10.5 |
溶解性(Solubility) | 溶于水,幾乎不溶于乙醇和甘油 |
比活力(Specific activity)* | >250 U/mg |
*活力定義(Unit definition):The activity causing a change in absorbance of 0.003/minute at 253 nm. |
運輸和保存方法
冰袋運輸,。凍干粉2~8℃干燥保存,,有效期2年。
注意事項
1)為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
2)胰蛋白凍干粉產(chǎn)品常遇到的活性定義及其轉(zhuǎn)換,
1 BAEE U:在25℃,,pH 7.6 的條件下,,以BAEE為底物,3.2 mL的反應(yīng)體系中,,A253吸光值每分鐘會發(fā)生0.001的變化即為一個酶活單位,。
1 TAME U:在25℃,pH 8.2,,0.001 M的Ca2+的條件下,,每分鐘水解 1 μM的TAME 的樣品量。
1 USP U:在條件下,,每分鐘引起吸光值發(fā)生0.003的變化的樣品活性,。
1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit
3)本產(chǎn)品僅作科研用途!
使用方法(用于貼壁細胞的消化)
1. 濃縮液(0.25%)的配置
稱取0.25 g粉末溶于100 mL HBSS(無鈣,,鎂)緩沖液,,并調(diào)整pH在7.4-7.6范圍。此時得到的即0.25%濃縮液,,置于4℃短時間保存,,3個月相對穩(wěn)定。建議分裝凍存,,利于長期保存,。解凍后可能會出現(xiàn)少量沉淀,屬于正?,F(xiàn)象,,不會影響其使用效力。
【注】凍干粉也可溶于其他不含鈣鎂離子的平衡鹽緩沖液如PBS,。
細胞的消化可以直接用溶液,,但通常使用的是-EDTA溶液,因為EDTA是一種II價金屬離子螯合劑,,能夠螯合鈣鎂離子,,減少細胞間的粘附性,從而增強的活性,。
2. -EDTA溶液的配制(0.25%(w/v)):
無Ca2+,、Mg2+及酚紅的 | To 500 mL |
1.25 g | |
EDTA | 0.10 g |
3. 貼壁細胞的消化
方法一
1)移除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液,,用不含Ca2+、Mg2+的緩沖液清洗單層貼壁細胞,,直至清除殘余血清,,吸除鹽溶液。
2)向上述貼壁細胞中加入適量-EDTA溶液,,至覆蓋細胞即可,。
3)傾斜培養(yǎng)板,吸取-EDTA溶液,,反復(fù)吹洗細胞數(shù)次,,注意消化時間不可過長。
【注】消化時間跟細胞類型,、細胞密度,、所用血清濃度、活性,、以及消化前細胞培養(yǎng)時間有關(guān),。
4)將細胞于室溫孵育直至細胞分離,期間可將細胞培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察,,避免細胞過度消化,,從而避免對細胞造成的損傷。
5)加入10 mL細胞培養(yǎng)液,,輕輕反復(fù)吹吸從而將細胞從培養(yǎng)板底盡可能吹離,,吹洗時盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
6)進行下一步操作或?qū)⒓毎麅龃妗?/span>
【注】操作時務(wù)必小心謹慎,,同時時刻注意避免交叉污染發(fā)生的可能性,。
方法二
以25 cm2 T-Flask為例,
1)無菌條件下吸除培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液,。
2)加入3 mL冰的-EDTA溶液(配方同上),。
3)孵育30 s(或更長,如果需要),。置于低倍鏡觀察,,如果有部分細胞開始變圓脫離培養(yǎng)瓶壁,此時可吸除溶液,,繼續(xù)孵育至細胞脫落,。
4)加入10 mL新鮮MEM培養(yǎng)液,可用槍快速的將培養(yǎng)液加入,,有助于使細胞脫落,;然后使用相同的槍頭,輕輕地多次吹洗細胞并混勻后,,吸取其中5 mL于一個新的培養(yǎng)瓶中,。
5)置培養(yǎng)條件下孵育,。