胰蛋白酶-EDTA消化液
- 公司名稱(chēng) 北京索萊寶科技有限公司
- 品牌 SOLARBIO/索萊寶
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 北京市通州區(qū)馬駒橋鎮(zhèn)聯(lián)東U谷景盛南四街15號(hào)85A三層
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2016/10/13 18:05:45
- 訪問(wèn)次數(shù) 1353
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別名:胰酶EDTA消化液
產(chǎn)品編號(hào):T1300
詳細(xì)介紹:在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散(將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液)和傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液,。常用的消化液為胰蛋白酶,,EDTA,其功能主要是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解,,使組織或細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞,,制成細(xì)胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。
胰蛋白酶(Trypsin)簡(jiǎn)稱(chēng)胰酶,,是由動(dòng)物豬胰臟中提取的一種蛋白酶制劑,。胰蛋白酶作用于與賴(lài)氨酸或精氨酸相連接的肽健,除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白,,影響細(xì)胞骨架,,打開(kāi)細(xì)胞-細(xì)胞,細(xì)胞-基質(zhì)之間的連接從而使細(xì)胞從培養(yǎng)板上脫落下來(lái)并使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞,。胰蛋白酶液濃度越高,,作用越強(qiáng),但超過(guò)一定限度會(huì)損傷細(xì)胞,。細(xì)胞消化用胰蛋白酶常用的工作濃度為0.25%,,pH為7.2-7.4之間,用濾器過(guò)濾除菌,。EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子,,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。注意EDTA不能被血清中和,,使用后培養(yǎng)瓶要*清洗,,否則再培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞容易脫壁。
胰蛋白酶液消化時(shí)間:2-10分鐘,。用含血清培養(yǎng)液終止其對(duì)細(xì)胞的消化作用,。
使用說(shuō)明:1、貼壁細(xì)胞的消化:貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長(zhǎng)成致密單層后,,繼續(xù)生長(zhǎng)的空間不足,,培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成份也消耗較多,,同時(shí)代謝廢物也有較多堆積,需要分瓶培養(yǎng),,擴(kuò)增,、傳代。對(duì)于懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞和貼壁不太緊的細(xì)胞如SP2/0,,293等,,可直接吹散后分瓶;而對(duì)于貼壁較緊的細(xì)胞如Hela,,HepG2,,CHO等,則需要以細(xì)胞消化液消化后,,才能脫落和分散,,擴(kuò)瓶。一般操作過(guò)程為(以下操作均必須嚴(yán)格按無(wú)菌操作的要求進(jìn)行):
(1)將長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去,;
(2)加入0.25%胰酶溶液,,視細(xì)胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多(依培養(yǎng)器皿的大小而定),以使充分浸潤(rùn),;
(3)一般消化時(shí)間約為1至3分鐘,,肉眼觀察瓶底由半透明(細(xì)胞單層連接成片)轉(zhuǎn)為點(diǎn)狀透明(出現(xiàn)細(xì)小空隙)時(shí),棄去細(xì)胞消化液,,并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化,,吹打分散;
(4)視實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆秩攵嗥坷^續(xù)培養(yǎng),,一般比例為一傳二到一傳四的。
2,、組織的消化:不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
注意事項(xiàng):1.由于組織或細(xì)胞性質(zhì)不同,,實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)具體情況,,確定佳消化時(shí)間;消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁和生長(zhǎng)狀況,;
2、分裝胰蛋白酶-EDTA消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染,;
3,、胰蛋白酶-EDTA消化液建議-20℃保存,切忌反復(fù)凍融,,
4,、為了您的安全和健康,,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套進(jìn)行試驗(yàn)操作。
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