胰蛋白酶-EDTA消化液
- 公司名稱 北京索萊寶科技有限公司
- 品牌 SOLARBIO/索萊寶
- 型號
- 產(chǎn)地 北京市通州區(qū)馬駒橋鎮(zhèn)聯(lián)東U谷景盛南四街15號85A三層
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2016/10/13 18:05:45
- 訪問次數(shù) 1360
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別名:胰酶EDTA消化液
產(chǎn)品編號:T1300
詳細(xì)介紹:在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散(將組織塊制備成單個細(xì)胞懸液)和傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,,貼壁生長細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液,。常用的消化液為胰蛋白酶,EDTA,,其功能主要是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解,,使組織或細(xì)胞分散成單個細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液用于進一步的實驗,。
胰蛋白酶(Trypsin)簡稱胰酶,,是由動物豬胰臟中提取的一種蛋白酶制劑。胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健,,除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白,,影響細(xì)胞骨架,打開細(xì)胞-細(xì)胞,,細(xì)胞-基質(zhì)之間的連接從而使細(xì)胞從培養(yǎng)板上脫落下來并使細(xì)胞分散成單個細(xì)胞。胰蛋白酶液濃度越高,作用越強,,但超過一定限度會損傷細(xì)胞,。細(xì)胞消化用胰蛋白酶常用的工作濃度為0.25%,pH為7.2-7.4之間,,用濾器過濾除菌,。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性,。注意EDTA不能被血清中和,,使用后培養(yǎng)瓶要*清洗,否則再培養(yǎng)時細(xì)胞容易脫壁,。
胰蛋白酶液消化時間:2-10分鐘,。用含血清培養(yǎng)液終止其對細(xì)胞的消化作用。
使用說明:1,、貼壁細(xì)胞的消化:貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長成致密單層后,,繼續(xù)生長的空間不足,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多,,同時代謝廢物也有較多堆積,,需要分瓶培養(yǎng),擴增,、傳代,。對于懸浮生長細(xì)胞和貼壁不太緊的細(xì)胞如SP2/0,293等,,可直接吹散后分瓶,;而對于貼壁較緊的細(xì)胞如Hela,HepG2,,CHO等,,則需要以細(xì)胞消化液消化后,才能脫落和分散,,擴瓶,。一般操作過程為(以下操作均必須嚴(yán)格按無菌操作的要求進行):
(1)將長成致密單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶中原來的培養(yǎng)液棄去;
(2)加入0.25%胰酶溶液,,視細(xì)胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多(依培養(yǎng)器皿的大小而定),,以使充分浸潤;
(3)一般消化時間約為1至3分鐘,,肉眼觀察瓶底由半透明(細(xì)胞單層連接成片)轉(zhuǎn)為點狀透明(出現(xiàn)細(xì)小空隙)時,,棄去細(xì)胞消化液,并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化,,吹打分散,;
(4)視實驗?zāi)康姆秩攵嗥坷^續(xù)培養(yǎng),一般比例為一傳二到一傳四的。
2,、組織的消化:不同的組織需要消化的時間相差很大,,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
注意事項:1.由于組織或細(xì)胞性質(zhì)不同,,實驗人員應(yīng)依據(jù)具體情況,,確定佳消化時間;消化細(xì)胞時間不宜過長,,否則會影響細(xì)胞貼壁和生長狀況,;
2、分裝胰蛋白酶-EDTA消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染,;
3、胰蛋白酶-EDTA消化液建議-20℃保存,,切忌反復(fù)凍融,,
4、為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套進行試驗操作。
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北京索萊寶科技有限公司,www.solarbio.cn
:羅晉嫻
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