胰蛋白酶-EDTA消化液
- 公司名稱 北京索萊寶科技有限公司
- 品牌 SOLARBIO/索萊寶
- 型號
- 產(chǎn)地 北京市通州區(qū)馬駒橋鎮(zhèn)聯(lián)東U谷景盛南四街15號85A三層
- 廠商性質 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2016/10/13 18:05:45
- 訪問次數(shù) 1342
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別名:胰酶EDTA消化液
產(chǎn)品編號:T1300
詳細介紹:在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)和傳代細胞培養(yǎng)中,,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液,。常用的消化液為胰蛋白酶,EDTA,,其功能主要是使細胞間的蛋白質水解,,使組織或細胞分散成單個細胞,制成細胞懸液用于進一步的實驗,。
胰蛋白酶(Trypsin)簡稱胰酶,,是由動物豬胰臟中提取的一種蛋白酶制劑。胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健,,除去細胞間粘蛋白及糖蛋白,,影響細胞骨架,打開細胞-細胞,,細胞-基質之間的連接從而使細胞從培養(yǎng)板上脫落下來并使細胞分散成單個細胞,。胰蛋白酶液濃度越高,作用越強,,但超過一定限度會損傷細胞,。細胞消化用胰蛋白酶常用的工作濃度為0.25%,pH為7.2-7.4之間,,用濾器過濾除菌,。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性,。注意EDTA不能被血清中和,,使用后培養(yǎng)瓶要*清洗,否則再培養(yǎng)時細胞容易脫壁,。
胰蛋白酶液消化時間:2-10分鐘,。用含血清培養(yǎng)液終止其對細胞的消化作用。
使用說明:1,、貼壁細胞的消化:貼壁細胞在培養(yǎng)瓶中長成致密單層后,,繼續(xù)生長的空間不足,,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多,同時代謝廢物也有較多堆積,,需要分瓶培養(yǎng),,擴增、傳代,。對于懸浮生長細胞和貼壁不太緊的細胞如SP2/0,,293等,可直接吹散后分瓶,;而對于貼壁較緊的細胞如Hela,,HepG2,CHO等,,則需要以細胞消化液消化后,,才能脫落和分散,擴瓶,。一般操作過程為(以下操作均必須嚴格按無菌操作的要求進行):
(1)將長成致密單層細胞的細胞瓶中原來的培養(yǎng)液棄去,;
(2)加入0.25%胰酶溶液,視細胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多(依培養(yǎng)器皿的大小而定),,以使充分浸潤;
(3)一般消化時間約為1至3分鐘,,肉眼觀察瓶底由半透明(細胞單層連接成片)轉為點狀透明(出現(xiàn)細小空隙)時,,棄去細胞消化液,并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化,,吹打分散,;
(4)視實驗目的分入多瓶繼續(xù)培養(yǎng),一般比例為一傳二到一傳四的,。
2,、組織的消化:不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜,。
注意事項:1.由于組織或細胞性質不同,,實驗人員應依據(jù)具體情況,確定佳消化時間,;消化細胞時間不宜過長,,否則會影響細胞貼壁和生長狀況;
2,、分裝胰蛋白酶-EDTA消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染,;
3、胰蛋白酶-EDTA消化液建議-20℃保存,,切忌反復凍融,,
4,、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套進行試驗操作,。
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北京索萊寶科技有限公司,,www.solarbio.cn
:羅晉嫻
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