一,、背景及概述

內(nèi)皮細(xì)胞系指血管、淋巴管的內(nèi)膜上皮將內(nèi)腔面覆蓋的細(xì)胞,。多數(shù)是單層扁平上皮屬中胎葉性的上皮,。血液循環(huán)和組織中大單核的游走的吞噬細(xì)胞有人認(rèn)為是來(lái)自增生的血管內(nèi)皮,。小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官,，位于胸腔,，左右各一，覆蓋于心之上,。肺有分葉,，左二右三，共五葉,。肺經(jīng)肺系（指氣管,、支氣管等）與喉、鼻相連,，故稱喉為肺之門戶,，鼻為肺之外竅。微血管內(nèi)皮細(xì)胞密切參與包括再生,、發(fā)育,、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應(yīng)。細(xì)胞呈梭形或多角形,，形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列,。小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成半選擇性屏障，該屏障對(duì)于肺氣體交換,，調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動(dòng)具有重要意義,。

二、細(xì)胞傳代培養(yǎng)

將長(zhǎng)成單層的原代細(xì)胞加0.5g/L胰蛋白酶0.2g/LEDTA后置37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化5min左右,，鏡下觀察,，當(dāng)細(xì)胞間連接疏松時(shí)立即加入ECM培養(yǎng)基，吹打使細(xì)胞脫落并充分混勻,，按1∶1比例傳代,。

三、細(xì)胞純化

肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞在組織塊取出后,，可以看到局部有成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),，采取機(jī)械刮擦的方法和ECM培養(yǎng)基的定向分選功能進(jìn)行純化。

四,、細(xì)胞鑒定

用細(xì)胞免疫組化法檢測(cè)ⅧF-Ag和CD31膜抗原將匯合度達(dá)80%的96孔板細(xì)胞,，PBS洗3次。40g/L多聚甲醛固定30min,。ⅧF-Ag組需加2,。5mL/LTritonx-100,，30～40μL/孔,，10min,，PBS洗5min×3次。然后加H2O2(300mL/L的H2O2甲醇=1∶50),，室溫30min,，PBS洗5min×3次。BSA封閉30min,。吸去BSA,，直接加CD31和ⅧF-Ag，對(duì)照組加相同體積的PBS,，蓋底即可,，4℃過(guò)夜。第2日,，吸去一抗,，PBS洗5min×3次。加二抗,，室溫20min,，PBS洗5min×3次。加SABC30～40μL/孔,，室溫20min,，PBS洗5min×4次。加DAB30～40μL/孔,，5～30min,，顯微鏡觀察染色程度。PBS洗3～5次,。蘇木精染色1～2min,，用熒光倒置顯微鏡拍照，BiosensDigitalImagingSystem灰度掃描儀掃描以檢測(cè)ⅧF-Ag和CD31膜抗原水平,。

五,、相關(guān)研究

有實(shí)驗(yàn)研究藻酸雙酯鈉(PSS)對(duì)脂多糖(LPS)所致的小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(PMVEC)損傷的保護(hù)作用。方法體外培養(yǎng)PMVEC,，隨機(jī)將細(xì)胞分為空白對(duì)照組(C組),、LPS刺激組(L組)、PSS+LPS組(LP組),。采用MTT法檢測(cè)PSS對(duì)LPS刺激PMVEC的細(xì)胞活力的影響,，虎紅染色法測(cè)定中性粒細(xì)胞(PMN)對(duì)PMVEC黏附數(shù)量的影響，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)3組培養(yǎng)上清液中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)的濃度,。結(jié)果PSS能抑制LPS所致的PMVEC細(xì)胞活力下降,；與C組比較，L組的PMVEC與PMN的黏附數(shù)量明顯增加,，TNF-α和ICAM-1的表達(dá)顯著增加,；與L組比較,，PSS預(yù)處理1h能顯著降低LPS所致的PMVEC與PMN的黏附，LP組的TNF-α和ICAM-1表達(dá)顯著降低,。結(jié)論P(yáng)SS能抑制LPS對(duì)PMVEC的損傷及PMVEC與PMN的黏附,，其作用機(jī)制可能與降低ICAM-1和TNF-α的表達(dá)有關(guān)。

此外,，還有實(shí)驗(yàn)研究熱打擊及10%中暑小鼠血清刺激肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(PMVECs)對(duì)PMVECs表達(dá)血管內(nèi)皮黏附分子(VCAM-1)和細(xì)胞間黏附分子(ICAM-1)水平及其黏附單核細(xì)胞能力的影響,。

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