WB實驗注意細節(jié)

1. 細胞樣本,，收細胞時,， PBS預冷。

2. 組織樣本在取材時離體組織應盡快凍存,，可以置于液氮中迅速冷凍,，使用組織勻漿機進行勻漿時,， 一次研磨時間不宜過長， 40s左右即可,，如研磨不充分,，可再次研磨。

3. PMSF應注意搖勻至無結晶時方可使用,。

4. 冰上裂解時,，可以晃動以使裂解充分。

5. 裂解后的樣本盡量分裝保存,，避免反復凍融,，盡快變性使用。

6. BCA定量時盡量不使用96孔板最邊緣一圈（由于有些儀器邊緣效應）,。

7. 樣本可以根據(jù)具體情況稀釋合適的倍數(shù)再進行定量,，以免超出標曲范圍。

8. BCA定量時,，可以使用儀器中速輕微震蕩3-10秒,，混勻96孔板內(nèi)液體，再進行測量,。

9. 變性時,，注意加熱后小心管蓋爆開。

10. 配膠時,，板子一定徹底清洗干凈,。

11. 配膠的各組分注意充分混勻。

12. 點樣時,，多余的孔可以用loading buffer補齊,。

13. 轉膜時， 一定帶手套才可以觸碰濾紙和膜,，以防污染,。

14. 轉膜不可放反，牢記黑膠白膜,，注意電極正負極。

15. 封閉時,， BSA或牛奶一定充分溶解,。

16. 抗體種屬要注意區(qū)分。

17. 洗膜要充分,。

18. 顯影液應滴加均勻,。

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