免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

一,、制片

選無自發(fā)性熒光的石英玻片或普通優(yōu)質(zhì)玻片,，洗凈后浸泡于無水乙醇和乙氧基乙烷等量混合液中,。用時(shí)取出用綢布擦凈,。將待檢樣品如組織塊剪成適當(dāng)大小印壓于玻片上,。也可采用冰凍切片或石蠟切片樣品,。

二、固定

除研究細(xì)胞表面抗原或不穩(wěn)定抗原可不固定外,，--般均應(yīng)固定,。

固定的作用有三:

1.防止標(biāo)本從玻片上脫落。

2.除去防礙抗原抗體結(jié)合的類脂,，使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果,。

3.固定的標(biāo)本易于保存，如組織切片固定后在-20%C下可保存一年而不改變其染色特性,。

標(biāo)本的固定原則是:

1.不能損傷細(xì)胞內(nèi)的抗原,。

2.不能凝集蛋白質(zhì)。

3.不能損傷細(xì)胞形態(tài),。

4.固定后應(yīng)保持細(xì)胞膜的通透性,，以允許抗體進(jìn)入與抗原結(jié)合,。

三、水洗

固定后以冷的0.01 Mol/L pH7 4PBS液浸泡沖洗,，后以蒸餾水沖洗,，防止自發(fā)性熒光。

四,、染色

染色分直接染色法與間接染色法,。

1.材料與試劑

(1)熒光抗體，稀釋至應(yīng)用濃度,。

(2) 0.01 Mol/L pH7 .4PBS液

(3) 9份優(yōu)質(zhì)甘油加1份pH7 .4PBS液即為甘油緩沖液,。甘油有減少非特異性熒光的作用。

(4)帶蓋方盤,。

2. 直接染色法

(1)將固定好的玻片置于濕盤中,，滴加熒光抗體染色液，以覆蓋為度,，加蓋,，37°C感做30min~45min.

(2) PBS沖洗3次，每次沖洗3 min,即3x3沖洗,。

(3)蒸餾水沖洗,。

(4)滴甘油緩沖液一滴，封片,，熒光顯微鏡檢查。

3.間接染色法

(1) 檢查抗原:

①取固定標(biāo)本,，加已知的免疫血清,，37°C孵育30 min。

②以PBS液3x3沖洗,。

③再加熒光標(biāo)記的抗抗體,，37°C孵育30 min。

④PBS 3x3沖洗,。

⑤H2O沖洗,，涼干。

⑥加甘油緩沖液,，封片,、鏡檢。

(2)檢查抗體:

①兔疫后動(dòng)物的淋巴組織涂片,，自然干燥,，甲醇固定。

②滴加相應(yīng)抗原液(按1: 100~1: 500稀釋),， 37°C孵育30 min.

③PBS液3x3沖洗,。

④加熒光抗體,，37°C孵育30 min.

⑤PBS液3x3沖洗。

⑥水洗,，干,。

⑦加甘油緩沖液，封片,、鏡檢,。

[項(xiàng)目開展范圍]慢病毒,腺病毒，RNAI類,， 分子生物實(shí)驗(yàn),，病理實(shí)驗(yàn)，免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),，細(xì)胞實(shí)驗(yàn),，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn),，芯片類實(shí)驗(yàn),，并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計(jì)指導(dǎo)、基金申請(qǐng)指導(dǎo),、SCI. 核心期刊等服務(wù),。

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