一,、檢驗(yàn)原理

培養(yǎng)基預(yù)先混合嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢,，并含有 pH 指示劑,。加入樣品并溫浴后,，若該樣品中不含有抗生素或抗生素的濃度低于檢測(cè)限,，細(xì)菌芽孢將在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)并利用糖產(chǎn)酸,，pH 指示劑的紫色變?yōu)辄S色,。相反，如果樣品中含有高于檢測(cè)限的抗生素,，則細(xì)菌芽孢不會(huì)生長(zhǎng),，pH 指示劑的顏色保持不變，仍為紫色,。

二,、檢驗(yàn)程序

1、芽孢懸液：

將嗜熱脂肪芽孢桿菌菌種劃線(xiàn)移種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板表面,，56 ℃培養(yǎng) 24 h 后挑取乳白色半透明圓形特征菌落,，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上再次劃線(xiàn)培養(yǎng)，56 ℃培養(yǎng)24 h 后轉(zhuǎn)入 36 ℃培養(yǎng) 3 d～4 d,，鏡檢芽孢產(chǎn)率達(dá)到 95%以上時(shí)進(jìn)行芽孢懸液的制備,。每 塊平板用 1 mL～3 mL無(wú)菌磷酸鹽緩沖液洗脫培養(yǎng)基表面的菌苔（如果使用克氏瓶，每瓶使用無(wú)菌磷酸鹽緩沖液 10 mL～20 mL）,。將洗脫液 5 000 r/min離心 15 min,。取沉淀物加無(wú)菌0.03 mol/L 磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）制成 10 ９ cfu/mL 芽孢懸液,，置 80 ℃恒溫水浴中 10 min 后，密封防止水分蒸發(fā),，置冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

2,、測(cè)試培養(yǎng)基：

在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基中加入適量芽孢懸液，混合均勻,，使最終的芽孢濃度為 8×10 ５ ～2×10 ６ cfu/mL,。混合芽孢懸液的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基分裝小試管,，每管 200 μL,，密封防止水分蒸發(fā)。這樣配制好的測(cè)試培養(yǎng)基可以在冰箱保存 6 個(gè)月,。

3,、培養(yǎng)操作：

吸取樣品100 μL加入含有芽孢的測(cè)試培養(yǎng)基中，輕 輕旋轉(zhuǎn)試管混勻,。每 份檢樣作二份,，另外再作陰性和陽(yáng)性對(duì)照各一份，陽(yáng)性對(duì)照管為 100 μL 青霉素 G 參照溶液,，陰性對(duì)照管為 100 μL 無(wú)抗生素的脫脂乳,。于 65℃水浴培養(yǎng) 2.5 h，觀(guān)察培養(yǎng)基顏色的變化,。如果顏色沒(méi)有變化,，須再于水浴中培養(yǎng) 30 min 作最終觀(guān)察

4、判斷方法：

在白色背景前從側(cè)面和底部觀(guān)察小試管內(nèi)培養(yǎng)基顏色,。保持培養(yǎng)基原有的紫色為陽(yáng)性結(jié)果,，培養(yǎng)基變成黃色或黃綠色為陰性結(jié)果，顏色處于二者之間,，為可疑結(jié)果,。對(duì)于可疑結(jié)果應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)30 min 再進(jìn)行最終觀(guān)察。如果培養(yǎng)基顏色仍然處于黃色－紫色之間,，表示抗生素濃度接近方法的檢出限,，此時(shí)建議重新檢測(cè)一次。

5,、報(bào)告:

最終觀(guān)察時(shí),，培養(yǎng)基依然保持原有的紫色，可以報(bào)告為抗生素殘留陽(yáng)性,。

培養(yǎng)基變?yōu)槌庶S色或黃綠色時(shí),，可以報(bào)告為抗生素殘留陰性。

本方法檢測(cè)幾種常見(jiàn)抗生素的檢出限為：青霉素3 μg/L，鏈霉素 50 μg/L,，慶大霉素 30 μg/L,，卡那霉素 50 μg/L。

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