本試劑盒只能用于科學研究,，不得用于醫(yī)學診斷

大鼠（Rat）乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）

ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被乙型肝炎病毒表面抗體的包被微孔中，依次加入標本,、HRP標記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）的存在與否,。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清,。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用,。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3.  預處理后的樣本無需稀釋,，直接取50μL加樣即可。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作,。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次,。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5次,。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設置陰,、陽性對照孔和樣本孔，陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照各50μL；

3.  待測樣本孔加待測樣本50μL,；

4.  隨后陰,、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

結果判斷

 1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15,。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,，樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

試劑盒性能

1.  準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；陰性對照孔OD值平均值≤0.15,，說明試驗結果有效。

2.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應,。

3.  重復性：板內,、板間變異系數(shù)均小于15%。

4.  貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。

5.  有效期：6個月

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