在生物醫(yī)學(xué)研究的廣闊領(lǐng)域中,，細(xì)胞活性檢測(cè)扮演著至關(guān)重要的角色。它不僅幫助科學(xué)家們?cè)u(píng)估細(xì)胞的生存狀態(tài)，還能深入了解細(xì)胞對(duì)藥物、環(huán)境變化或病理過(guò)程的響應(yīng),。細(xì)胞活性檢測(cè)通常包括測(cè)量細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和細(xì)胞死亡等方面,。今天,，小愛(ài)向大家介紹細(xì)胞活性檢測(cè)的六大常用方法：ATP生物發(fā)光法、LDH檢測(cè)法,、MTT比色法,、CCK-8法、熒光染料法和細(xì)胞凋亡檢測(cè)法,，一起揭秘細(xì)胞活力的科學(xué)奧秘。

1,、ATP生物發(fā)光法

細(xì)胞內(nèi)ATP（腺苷三磷酸）的含量是細(xì)胞能量代謝的直接指標(biāo),。ATP生物發(fā)光法通過(guò)測(cè)量細(xì)胞內(nèi)ATP的水平來(lái)評(píng)估細(xì)胞活性。這種方法具有高靈敏度和寬動(dòng)態(tài)范圍,，尤其適合于需要高靈敏度檢測(cè)的實(shí)驗(yàn),。

圖1 ATP檢測(cè)試劑盒(abs580117)檢測(cè)細(xì)胞活性的原理圖

ATP生物發(fā)光法的主要原理是在有氧環(huán)境下，熒光素在熒光素酶和Mg²⁺的催化作用下與ATP發(fā)生反應(yīng),，生成熒光素-AMP復(fù)合體并釋放出焦磷酸(PPi),。隨后，熒光素-AMP復(fù)合體在O₂的作用下進(jìn)一步生成氧化熒光素,，同時(shí)釋放出CO₂和H₂O,。在這個(gè)過(guò)程中，激發(fā)態(tài)的氧化熒光素返回到基態(tài)時(shí)會(huì)發(fā)出光子,，光子的數(shù)量與ATP含量成正比,，因此可以通過(guò)測(cè)量光強(qiáng)度來(lái)定量ATP的含量。

2,、LDH檢測(cè)法

乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase, LDH)是一種廣泛存在于細(xì)胞中的酶,，它在糖酵解途徑中起著關(guān)鍵作用,，能夠催化乳酸和丙酮酸之間的可逆反應(yīng)。LDH催化乳酸產(chǎn)生丙酮酸,，丙酮酸與 2,4-二硝基ben肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,，后者在堿性溶液中呈棕紅色，顏色的深淺與丙酮酸的濃度呈正比,，通過(guò)測(cè)定OD值,，可計(jì)算LDH的活力。在細(xì)胞活性檢測(cè)中,，LDH的釋放通常被用作細(xì)胞膜完整性的指標(biāo),。當(dāng)細(xì)胞膜受損時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的LDH會(huì)釋放到培養(yǎng)基中,，通過(guò)測(cè)定培養(yǎng)基中LDH的活性,，可以評(píng)估細(xì)胞的損傷或死亡程度。

3,、MTT比色法

MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物）比色法是一種經(jīng)典的細(xì)胞活性檢測(cè)方法,。它通過(guò)測(cè)量活細(xì)胞中脫氫酶的活性，將MTT還原成紫色的甲瓚產(chǎn)物,，從而間接反映細(xì)胞的代謝活性,。這種方法操作簡(jiǎn)單，成本低廉,，是實(shí)驗(yàn)室中常用的篩選工具,。

4、CCK-8法

CCK-8(Cell Counting Kit-8)法是一種基于WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺苯基)-2H-四唑單鈉鹽）的比色方法,。它通過(guò)測(cè)量細(xì)胞線粒體脫氫酶的活性來(lái)評(píng)估細(xì)胞活性,。CCK-8法具有較高的靈敏度和較寬的動(dòng)態(tài)范圍，適合于各種細(xì)胞類(lèi)型的活性檢測(cè),。

5,、熒光染料法

熒光染料法利用特定的熒光染料，如Calcein-AM或CFSE,，來(lái)標(biāo)記活細(xì)胞,。這些染料在活細(xì)胞內(nèi)被代謝成熒光產(chǎn)物，通過(guò)流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行檢測(cè),。熒光染料法可以提供直觀的細(xì)胞活力圖像,，適用于細(xì)胞增殖和遷移研究。

6,、細(xì)胞凋亡檢測(cè)

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞程序性死亡的過(guò)程,，與細(xì)胞活性密切相關(guān)。通過(guò)Annexin V和PI（碘化丙啶）染色，可以檢測(cè)細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸外化,，從而評(píng)估細(xì)胞凋亡的程度,。這種方法對(duì)于研究細(xì)胞死亡機(jī)制和藥物毒性具有重要意義。

細(xì)胞活性檢測(cè)六大常用方法優(yōu)缺點(diǎn)比較

每種方法都有其特定的應(yīng)用場(chǎng)景和限制,，選擇合適的檢測(cè)方法需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體需求和條件來(lái)決定。

下面小愛(ài)著重為大家介紹具有高靈敏度,、操作簡(jiǎn)便,、快速等優(yōu)點(diǎn)的ATP檢測(cè)法。

ATP檢測(cè)試劑盒(abs580117)使用方法

一,、產(chǎn)品組成

二,、使用方法

1、需自備的試劑和器材

1）細(xì)胞培養(yǎng)用pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)

2）Triton X-100

3）系列可調(diào)節(jié)量程移液器及吸頭

4）離心管及白色96孔板

5）化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀

2,、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1）樣品準(zhǔn)備：

①細(xì)胞培養(yǎng)上清的準(zhǔn)備：將需要測(cè)定的細(xì)胞接種到培養(yǎng)板中,，經(jīng)過(guò)干預(yù)因素處理后，直接吸取細(xì)胞上清,，如果是懸浮細(xì)胞,，4℃、300g離心5min,，收集上清,。

②細(xì)胞裂解上清的準(zhǔn)備：將需要測(cè)定的細(xì)胞(1×10⁶-1×10⁷)收集到5mL的離心管中，4℃,、300g離心5min,，棄去上清，然后加入200μL含0.1%Triton X-100的PBS,，冰浴裂解30min,，4℃、10000g離心10min,，收集上清,。

③組織裂解上清的準(zhǔn)備：將需要測(cè)定的組織(20-50mg)收集到玻璃勻漿器或自動(dòng)勻漿管中,，然后加入500μL含1%Triton X-100的PBS，勻漿1min,，4℃,、10000g離心10min，收集上清,。

注：各種樣品,，如果不立即進(jìn)行測(cè)定，請(qǐng)凍存于-80℃,；正式測(cè)定前根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，利用ATP Assay Buffer將樣品適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測(cè)定。

2）標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：

在1.5mL離心管中,，加入990μL ATP Assay Buffer,，再取10μL的100μM濃度ATP Standard加入離心管中配制1μM濃度ATP Standard；然后取另外8根1.5mL離心管,，分別加入200μL ATP Assay Buffer,，再吸取200μL的1μM濃度ATP Standard依次倍比稀釋為0.5、0.25,、0.125,、0.0625、0.0312,、0.0156,、0.0078、0.0039μM濃度,。

3）檢測(cè)工作液的準(zhǔn)備：

ATP檢測(cè)工作液的配制：根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)參考下表配制適當(dāng)量的ATP檢測(cè)工作液,，表中試劑按比例混合后即為ATP檢測(cè)工作液。

3,、操作步驟

1）在白色96孔板中設(shè)置空白對(duì)照孔,、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔，參考下表,，在空白對(duì)照孔中加入50μL ATP Assay Buffer,，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入50μL梯度濃度ATP 檢測(cè)工作液(0.0039-1μM)，在樣品孔中加入50 μL樣品,。

2）如上表所示,，各孔加入50μL的ATP檢測(cè)工作液，混勻,，室溫孵育5min,。

3）待反應(yīng)完成后,，利用化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀測(cè)定相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度(RLU),。

4）計(jì)算結(jié)果：利用標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，RLU值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并獲得橫縱坐標(biāo)之間的函數(shù)關(guān)系式,，然后利用各樣品的RLU值計(jì)算樣品中ATP濃度,。ATP標(biāo)曲測(cè)定如下圖所示：

細(xì)胞活性檢測(cè)是連接基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用的橋梁。通過(guò)上述六種常用方法,，研究人員可以更準(zhǔn)確地評(píng)估細(xì)胞的生存狀態(tài),，為疾病治療和藥物開(kāi)發(fā)提供重要信息。隨著生物技術(shù)的不斷進(jìn)步,，未來(lái)可能會(huì)有更多創(chuàng)新的檢測(cè)方法問(wèn)世,，為我們揭示細(xì)胞活力的更多奧秘。

本期產(chǎn)品推薦：

細(xì)胞染色產(chǎn)品推薦：

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC,、凋亡,、ELISA、ChIP,、Co-IP,、TR-FRET、生化檢測(cè),、殘留檢測(cè),、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類(lèi)器官試劑盒+基質(zhì)膠,，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子),、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒),；化合物大包裝,；輔助試劑、耗材/儀器,、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE,、B27、N2,、霍亂毒素B亞單位CTB,、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX,、重組人胰島素Insulin,、人源低密度脂蛋白LDL...