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蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)

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更新時(shí)間:2022-12-23 13:56:30瀏覽次數(shù):2180次

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WB蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)技術(shù)(Western Blot)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,,然后利用抗體進(jìn)行檢測,。對(duì)已知表達(dá)蛋白,,可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測,,對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物,,可通過融合部分的抗體檢測,。

 與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,,被檢測物是蛋白質(zhì),,“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗,。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變,。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),,再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),,經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá),。

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