BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析,。

測定原理：

堿性條件下，蛋白質中半胱an酸,、胱an酸,、色an酸、酪an酸以及肽鍵,，能將 Cu²⁺還原成Cu⁺,；2 分子的BCA 與Cu⁺結合，生成紫色絡合物,，在 540-595nm 有吸收峰,，562nm 處吸收峰zui強。

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組成：

工作液配制：臨用前請根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×0.2ml）,，將試劑A 和B 按照 50：1 的比例混合,，蓋緊后充分混勻。

具體產品的參數(shù)以收到產品說明書的參數(shù)為準

自備儀器和用品：

臺式離心機,、恒溫水浴鍋,、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板,、移液器和蒸餾水,。

樣品中可溶性蛋白質提取：

1,、液體樣品：澄清液體樣品可以直接測定,。

2、組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml提取液（自備,，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）冰浴勻漿，10000rpm,，4℃離心 10min,，取上清，即待測液,。

3 ,、細菌、細胞：按照細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w,，超聲 3 秒,，間隔 7 秒，總時間 3min）,；然后 10000rpm,， 4℃，離心 10min,，取上清置于冰上待測,。

測定操作：

1. 可見分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節(jié)波長到 562 nm,，蒸餾水調零,。

2. 工作液置于 60℃水浴預熱 30 min。

注意事項：空白管和標準管只需要做一次,。

計算公式：

Cpr (mg/ml)= C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）

=0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）

Cpr (mg/g 鮮重)= C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷ W

=0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷ W W: 樣本質量,，g

注意事項：

BCA 法蛋白含量測定試劑盒，適用于測定蛋白濃度在 20-5000μg/ml 樣品,。測定前取 1-2 個樣做預實驗,，若A 測定管－A 空白管﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測定,，以確保測定的準確性,。

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