一氧化氮（Nitric oxide,，NO）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100 管/96 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

NO（Nitric Oxide,，NO）廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán),、呼吸,、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中,，特別是神經(jīng)組織中較豐富,。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì),，發(fā)揮信號(hào)傳遞的作用,，是一種新型的生物信使分子,，在機(jī)體的生理,、病理過(guò)程中起著重要的作用。

測(cè)定原理：

NO 在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO —,，在酸性條件下,，NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物,，進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合,，產(chǎn)物在 550nm 處有特征吸收峰,，測(cè)定其吸光值，可以計(jì)算 NO 含量,。

一氧化氮含量測(cè)定試劑盒 信號(hào)系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑二：液體 6ml×1 瓶,，4℃避光保存。(用之前 60℃加熱震蕩 15min)

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

天平,、研缽或勻漿器,、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板,、蒸餾水,。

樣品處理：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿,。10000g,，4℃離心 15min，取上清,，置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌,、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒,，間隔 7 秒,，總時(shí)間 3min）；然后 10000g,， 4℃,，離心 15min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品：直接測(cè)定,。

測(cè)定步驟和操作表：

1,、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 550nm,。

2,、操作表

NO 含量計(jì)算：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.016x -0.0103,，R²= 0. 9986 1,、組織樣品：

（1） 按樣本質(zhì)量計(jì)算

NO 含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）×10^-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷W

（2） 按樣本蛋白濃度計(jì)算

NO 含量（μmol/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣×Cpr）×10^-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、細(xì)胞：

NO 含量（μmol/10⁴ cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10^-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

3,、其他樣品：

NO 含量（μmol/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷V 樣

= 125×（ΔA +0.0103）

V 反總：反應(yīng)總體積,，0.2ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積,，0.1ml,；V 樣總：加入提取液體積，1ml,；W：樣品質(zhì)量,，g；Cpr：蛋白濃度,，mg/ml

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.008x - 0.0103,，R²= 0. 9986 1、組織樣品：

（1） 按樣本重量計(jì)算

NO 含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）×10^-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷W

（2） 按樣本蛋白濃度計(jì)算

NO 含量（μmol/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反總÷（V 樣×Cpr）×10^-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr

2,、細(xì)胞：

NO 含量（μmol/10⁴ cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10^-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

3,、其他樣品：

NO 含量（μmol/L）=（ΔA +0.0103）÷0.008× V 反總÷V 樣= 250×（ΔA +0.0103）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml,；V 樣：反應(yīng)中樣品體積,，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積,，1ml,；W：樣品質(zhì)量，g,；Cpr：蛋白濃度,，mg/ml

一氧化氮含量測(cè)定試劑盒 信號(hào)系列-常備現(xiàn)貨