可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶（Soluble acid invertase, S-AI）試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一,。根據(jù)最適 pH，Ivr 分為酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性轉(zhuǎn)化酶（NI）兩種類型,。

AI 的最適pH 為 3～5,。AI 分為可溶性AI(S-AI)和細胞壁不溶性AI（B-AI）兩種類型。S-AI 主要存在于細胞液泡或自由空間中,，最適 pH 為 4.5~5.0（酸性）,，通過降解液泡中蔗糖，調(diào)節(jié)液泡中蔗糖的利用和果實內(nèi)糖類的積累,。

測定原理：

S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,，進一步與 3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物,，在 510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi) 510nm 光吸收增加速率與S-AI 活性成正比,。

可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶試劑盒   蔗糖-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶,，4℃保存；臨用前加入 10ml 試劑一充分溶解備用,；用不完的試劑 4℃保存;

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀,、臺式離心機、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）,，進行冰浴勻漿,。12000g 4℃離心 10min，取上清,，置冰上待測,。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 510nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、樣本測定,，（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

混勻， 37℃準確水浴 30min 后,，95℃水浴 10min（蓋緊,，以防水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）

混勻,，95℃水浴 10min（蓋緊,，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻,，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中,， 510nm 處記錄各管吸光值A(chǔ)，如果吸光值大于 2,，可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)),，ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設一個對照管,。

S-AI 活性計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001,；x 為標準品濃度（μg/ml），y 為吸光值,。

（1） 按蛋白濃度計算：

單位的定義：37℃每mg 蛋白每分鐘產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位,。

S-AI 活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2） 按鮮重計算：

單位的定義：37℃每g 組織每分鐘產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位。

S-AI 活性（μg/min/g 鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積,，0.05ml,；V2：加入提取液體積，1ml,；T：反應時間,，30min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml,；W：樣本鮮重,，g。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001,；x 為標準品濃度（μg/ml）,，y 為吸光值。

（1） 按蛋白濃度計算：

單位的定義：37℃每mg 蛋白每分鐘產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位,。

S-AI 活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2） 按鮮重計算：

單位的定義：37℃每g 組織每分鐘產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位,。

S-AI 活性（μg/min/g 鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2)÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.05ml,；V2：加入提取液體積,，1ml；T：反應時間,，30min,； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml,；W：樣本鮮重,，g。

可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶試劑盒   蔗糖-常備現(xiàn)貨