蔗糖合成酶（合成方向,；SS-Ⅱ）試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫"器官運輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向反應(yīng)酶,，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,，是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其合成方向SS-Ⅱ的活性對于植物蔗糖合成具有重要意義,。

測定原理：

SS-Ⅱ催化游離果糖與葡萄糖供體 UDPG 反應(yīng)生成蔗糖,，蔗糖與間苯er酚反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化，在480nm 下有特征吸收峰,，酶活力大小與顏色的深淺成正比,。

蔗糖合成酶（合成方向；SS-Ⅱ）試劑盒

組成：

試劑二：1000μg/ml 蔗糖溶液 10ml×1 瓶,，4℃保存,；試劑五：液體 6ml×1 瓶，4℃避光保存,；

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、水浴鍋、離心機(jī),、移液器,、微量石英比色皿/96 孔板、研缽,、冰

樣品測定的準(zhǔn)備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

測定步驟：

1,、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 480nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、樣本測定(在EP 管中加入下列試劑）：

混勻,，25℃準(zhǔn)確水浴 10min

沸水浴中煮沸 10min 左右（蓋緊,，以防止水分散失），冷卻

混勻,，沸水浴 30min,，冷卻后，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中,，480nm 下測定各管吸光值,。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只要做一管。每個測定管需要設(shè)一個對照管,。

SS-Ⅱ活性計算

1,、按照蛋白濃度計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×

（A 測定管-A 對照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷Cpr 2,、按照樣本鮮重計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位,。

SS-Ⅱ活性(μg /min/g 鮮重) = C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×

（A 測定管-A 對照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，1000μg/ml,；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.01ml； V2：加入提取液體積,，1ml,； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml,；W：樣本鮮重,，g,；T ：反應(yīng)時間：10min。

蔗糖合成酶（合成方向,；SS-Ⅱ）試劑盒