乙醇含量測定試劑盒說明書

可見分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

乙醇俗稱酒精,，是最常見的一元醇，在檢測酒的質量,、分析血液乙醇含量和果蔬品質判斷中通常需要頻繁,、大量地檢測乙醇含量。

1. 乙醇是酒的主要成分,，是衡量酒質量的重要指標之一,。我國是世界上zui早發(fā)明釀酒的國家，也是酒類產(chǎn)品消費大國,，其消費量居世界之shou,。因此，快速,、準確測定酒中乙醇含量,，對于確保酒的質量和保護消費者的健康具有重大意義。

2. 乙醇是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最基本的抑制物,，如果乙醇被大量攝入,，會不可逆抑制呼吸甚至導致死亡，血液中乙醇檢測結果通常作為認定是否酒后駕駛或醉酒駕駛的依據(jù),。

3. 乙醇是判斷儲藏過程中果蔬品質變化的重要指標,，研究表明，適當?shù)囊掖继幚砟軌驕p少腐爛和減輕果蔬生理病害,、延緩果蔬成熟和衰老進程,，從而延長貨架壽命。因此,，簡便,、準確和快速測定果蔬中乙醇含量具有非常重要的意義。

測定原理：

乙醇在乙醇脫氫酶的催化下氧化脫氫生成乙醛,，同時,，NAD 被還原生成NADH，NADH 在 1-mPMS 的作用下使WST-8 顯橙黃色，通過 450 nm 下測定吸光值變化可測得乙醇含量,。

乙醇含量測定試劑盒  輔酶Ⅰ系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶,，-20℃保存；臨用前加入 15 ml 試劑三充分溶解待用,，用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融；

自備儀器和用品：

可見分光光度計,、臺式離心機,、可調式移液器、1ml 玻璃比色皿,、研缽,、冰、蒸餾水,。

乙醇提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：蒸餾水體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 蒸餾水），進行勻漿,，8000g,，25℃離心 10min，取上清待測,。

2. 細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內,，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：蒸餾水體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 蒸餾水）,，超聲波破碎（冰浴,，功率 20％或 200W，超聲 3s,，間隔 10s,，重復 30 次）， 8000g,，25℃離心 10min,，取上清待測。

3. 血清（漿）等液體樣品：直接測定,。

測定步驟：

1. 分光光度計預熱 30min 以上,，調節(jié)波長至 450nm。

2. 工作液的配制：臨用前按照樣本數(shù)量,，按以下比例配制工作液

3. 樣本測定

按下表加入如下試劑

混勻后記錄 450nm 下測定初始吸光值A1,，和 37℃避光孵育 10min 后的吸光值 A2，計算

△A=A2-A1,。

乙醇含量計算：

標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0512x + 0.0055 R² = 0.9991,； x 為乙醇含量（μmol/ml）,，y 為吸光值差值△A。

1. 按照血清（漿）體積計算

乙醇含量（μmol/ml）= (△A-0.0055)÷0.0512

=19.5×(△A-0.0055)

2. 按照樣品質量計算

乙醇含量（μmol/g 鮮重）= [ (△A-0.0055)÷0.0512×V1]÷(W ×V1÷V2）

= 19.5×(△A-0.0055)÷W

3. 按照細菌或細胞密度計算

乙醇含量（μmol/10⁴ cell）= [ (△A-0.0055)÷0.0512×V1]÷（500×V1÷V2）

=0.039×(△A-0.0055)

V1：加入反應體系中樣本體積,，0.2ml,；V2：加入提取液體積，1 ml,； Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/ml；W：樣本質量,，g；500：細菌或細胞總數(shù),，500 萬,；

注意事項：

測定前取 1-2 個樣做預實驗，若△A﹥0.6 或乙醇含量﹥10μmol/ml,，需將樣本用蒸餾水稀釋后再測定,，以確保測定的準確性。

zui低檢測限：0.02μmol/ml,。

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