Ar 1193感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86123-01(10×100ul)/BFNC86123-02(50×100ul)/BFNC86123-03(100×100ul)

Ar.1193：                                                                   100μl/支
pCAMBIA2301(control vector, 10ng/μl)                         10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                         -80℃（12個月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes (carb^R,str^R,rif^R ) pRi1193 (agropine type)

產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物,。Ar.1193發(fā)根農(nóng)桿菌含有pRi1193農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,，特別適合豆科，茄科植物毛狀根的誘導(dǎo),，同時具有羧芐青霉素,，鏈霉素，利福平抗性,。

青旗生物生產(chǎn)的Ar.1193化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,，pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那霉素抗性）檢測，轉(zhuǎn)化效率>10⁴ cfu/μg DNA,。

常規(guī)操作方法

1.取-80℃保存的Ar.1193發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

2.  每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉(zhuǎn)化效率較高,，*使用前盡量做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的量）,，用手快速,、劇烈bo打管底混勻或用槍吹吸混勻，依次放于冰中靜置5分鐘,、液氮5分鐘,、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘,。

3. 冰浴中拿出放室溫,，加入700μl 無抗生素的TY液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2小時,。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 TY平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3 天

● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：

常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗,；S：敏感,。)

Ar 1193感受態(tài)細胞

● TY配方（1L）：

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補水到1L體積，*溶解后,，121度,、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液，121度,、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可,。

若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉,。

注意事項

1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10,；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降,；質(zhì)粒增大一倍,，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。

2. 混勻質(zhì)粒時應(yīng)用手指快速bo打管底或用槍吹吸混勻,，務(wù)必使質(zhì)?？焖佟⒕鶆蚍稚㈤_,，與感受態(tài)細胞充分接觸。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量,。

3. 平板上陽性克隆密度過大時,，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢,，菌落變小,，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量,。

4.  Ar.1193具有羧芐青霉素,、鏈霉素、利福平抗性,，不可用于具有羧芐,、鏈霉素或利福平抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。