K599感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86122-01(10×100ul)/BFNC86122-02(50×100ul)/BFNC86122-03(100×100ul)
K599 Competent Cell：                                            100μl/支
pCAMBIA2301(control vector, 10ng/μl)                         10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                         -80℃（12個月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes (str^R ) pRi2659 (agropine type)

產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。K599發(fā)根農(nóng)桿菌（NCPPB2659）含有pRi2659農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,，具有廣泛的宿主范圍（葫蘆科,，豆科，茄科等）,，同時具有鏈霉素抗性,。

青旗生物生產(chǎn)的K599化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那霉素抗性）檢測,，轉(zhuǎn)化效率>10³ cfu/μg DNA,。

常規(guī)操作方法

1.取-80℃保存的K599發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中,。

2.  每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉(zhuǎn)化效率較高,，首先使用前盡量做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量），用手快速,、劇烈bo打管底混勻或用槍吹吸混勻,，依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘,、37℃水浴5分鐘,、冰浴5分鐘。

3. 冰浴中拿出放室溫,，加入700μl 無抗生素的TY液體培養(yǎng)基,，于28℃振蕩培養(yǎng)2小時。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 TY平板上,，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3 天

K599感受態(tài)細(xì)胞

● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：

常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗；S：敏感,。)

● TY配方（1L）：

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補(bǔ)水到1L體積,，*溶解后,，121度、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液,，121度,、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。

若配制TY固體培養(yǎng)基,，則加入15g 瓊脂粉。

注意事項(xiàng)

1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10,；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍,，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級,。

2. 混勻質(zhì)粒時應(yīng)用手指快速bo打管底或用槍吹吸混勻，務(wù)必使質(zhì)?？焖?、均勻分散開，與感受態(tài)細(xì)胞充分接觸,。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽性克隆密度過大時,，由于營養(yǎng)不足,，陽性克隆生長變慢，菌落變小,，為了獲得大的菌落,，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量。

4.  K599具有鏈霉素抗性,，不可用于具有鏈霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化,。