Ar.Qual感受態(tài)細胞

產品規(guī)格CAT#: BFNC86120-01(10×100ul)/BFNC86120-02(50×100ul) /BFNC86120-03(100×100ul)
Ar.Qual：                                                                      100μl/支
pCAMBIA2301（control vector,，10ng/μl )                       10μl
保存條件(保質期)：                                            -80℃（12個月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes (str^R,Cam^R ) Ar Qual Ri (agropine type)

產品說明

發(fā)根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,，它能夠感染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.Qual發(fā)根農桿菌菌株含有農桿堿型Ri質粒,，具有廣泛的宿主范圍（玉米,，煙草，番茄,，柑橘等）,，同時具有鏈霉素，氯霉素抗性,。

青旗生物生產的Ar.Qual化學轉化感受態(tài)細胞經特殊工藝制作,，pCAMBIA2301質粒（卡那霉素抗性）檢測，轉化效率>10⁴ cfu/μg DNA,。

常規(guī)操作方法

1.取-80℃保存的Ar qual發(fā)根農桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

2.每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質粒DNA（轉化效率較高,，*使用前盡量做預實驗確定所加質粒的量）,，用手快速、劇烈bo打管底混勻或用槍吹吸混勻,，依次放于冰中靜置5分鐘,、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘,、冰浴5分鐘,。

3. 冰浴中拿出放室溫，加入700μl 無抗生素的TY液體培養(yǎng)基,，于28℃振蕩培養(yǎng)2小時,。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 TY平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3 天

Ar.Qual感受態(tài)細胞

● 農桿菌相關抗生素配方：

常用農桿菌抗性： (R：抗,；S：敏感,。)

● TY配方（1L）：

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補水到1L體積，*溶解后,，121度,、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液，121度,、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可,。

若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉,。

注意事項

1. 加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10,；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降,；質粒增大一倍,，轉化效率下降一個數量級。

2. 混勻質粒時應用手指快速bo打管底或用槍吹吸混勻,，務必使質?？焖佟⒕鶆蚍稚㈤_,，與感受態(tài)細胞充分接觸,。轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量,。

3. 平板上陽性克隆密度過大時,，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢,，菌落變小,，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量或降低涂板的菌量,。

4.  Ar.Qual具有鏈霉素,、氯霉素抗性，不可用于具有鏈霉素抗性或氯霉素抗性質粒的轉化,。