ATCC15834電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86117-01(10×100ul)/BFNC86117-02(50×100ul)
ATCC15834 Electro：                                                   50μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl )：                 10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                                          -80℃（12個月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes pRi15834 (agropine type)

產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物,。ATCC15834發(fā)根農(nóng)桿菌菌株來源于ATCC（美國模式培養(yǎng)物集存庫/American type culture collection），為發(fā)根農(nóng)桿菌原始菌株（ wild strain）,，含有pRi15834農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,，具有廣泛的宿主范圍（禾本科，豆科,，煙草等）,，特別適合對紫杉醇，青蒿等藥用植物毛狀根的誘導(dǎo),。

青旗生物生產(chǎn)的ATCC15834電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,，pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那霉素抗性）檢測，轉(zhuǎn)化效率>10⁵ cfu/μg DNA,。

常規(guī)操作方法

1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,，待其瀝干水分，正置5分鐘,，使乙醇充分揮發(fā),，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面,，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,，冰中靜置5分鐘充分降溫。

2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,，待其融化,，加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（體積不大于6ul，盡量用試劑盒抽提,，雙蒸水溶解,；轉(zhuǎn)化效率較高，*使用前盡量做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的量）,，用手bo打管底混勻,，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?；旌衔锟焖僖频诫姄舯?，蓋上杯蓋，空管保留待用,。

3. 啟動電轉(zhuǎn)儀,，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm,，V=2400 V（此參數(shù)為Biorad 推薦,，使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作），將電擊杯從冰中拿出,，吸水紙吸干外表面水份,，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動電擊,，電擊完成快速插入冰中,，加入1 ml無抗生素的TY，并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時,。

4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的平板上,，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)72小時

●ATCC15834菌株質(zhì)粒轉(zhuǎn)化相關(guān)抗生素使用濃度：

常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗,；S：敏感,。)

● YMB配方（1L）：

      Yeast extract            1g

      MgSO4·7H2O        0.2g

      K2HPO4                0.5g

      NaCl                     0.1g

      甘露醇                   10g

      補水到1L體積，*溶解后,，調(diào)PH值到7.0,，121度、20分鐘高溫滅菌

      若配制YMB固體培養(yǎng)基,，則加入15g 瓊脂粉,。

● TY配方（1L）：

      Tryptone                5g

      Yeast extract          3g

      補水到1L體積，*溶解后,，121度,、20分鐘高溫滅菌

      配制1M的氯化鈣水溶液，121度,、20分鐘高溫滅菌

      每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可,。

      若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉,。

注意事項

1. ATCC15834生長緩慢,，轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的ATCC15834菌涂布在含抗生素的平板上應(yīng)生長72小時。

2. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10,；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染,，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級,。

3. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡,，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量,。

4. 平板上陽性克隆密度過大時,，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢,，菌落變小,，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或終用于涂板的菌量,。