ATCC15834電轉感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86117-01(10×100ul)/BFNC86117-02(50×100ul)
ATCC15834 Electro：                                                   50μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl )：                 10μl

保存條件(保質期)：                                          -80℃（12個月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes pRi15834 (agropine type)

產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物,。ATCC15834發(fā)根農(nóng)桿菌菌株來源于ATCC（美國模式培養(yǎng)物集存庫/American type culture collection）,，為發(fā)根農(nóng)桿菌原始菌株（ wild strain）,，含有pRi15834農(nóng)桿堿型Ri質粒,，具有廣泛的宿主范圍（禾本科，豆科,，煙草等），特別適合對紫杉醇,，青蒿等藥用植物毛狀根的誘導,。

青旗生物生產(chǎn)的ATCC15834電轉感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301質粒（卡那霉素抗性）檢測,，轉化效率>10⁵ cfu/μg DNA。

常規(guī)操作方法

1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,，待其瀝干水分,，正置5分鐘,，使乙醇充分揮發(fā),，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,，壓實冰面,，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,，冰中靜置5分鐘充分降溫,。

2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,，待其融化，加入0.01-1 μg質粒DNA（體積不大于6ul,，盡量用試劑盒抽提,，雙蒸水溶解；轉化效率較高,，*使用前盡量做預實驗確定所加質粒的量），用手bo打管底混勻,，立即插入冰中,，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質粒混合物快速移到電擊杯中,，蓋上杯蓋,，空管保留待用,。

3. 啟動電轉儀，設置參數(shù)：C=25 μF,，PC=200 ohm,，V=2400 V（此參數(shù)為Biorad 推薦,，使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作）,，將電擊杯從冰中拿出,，吸水紙吸干外表面水份，快速放入電轉槽中,，啟動電擊，電擊完成快速插入冰中,，加入1 ml無抗生素的TY，并轉移到感受態(tài)空管中,，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時,。

4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的平板上,，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)72小時

●ATCC15834菌株質粒轉化相關抗生素使用濃度：

常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗,；S：敏感,。)

● YMB配方（1L）：

      Yeast extract            1g

      MgSO4·7H2O        0.2g

      K2HPO4                0.5g

      NaCl                     0.1g

      甘露醇                   10g

      補水到1L體積，*溶解后,，調PH值到7.0,，121度,、20分鐘高溫滅菌

      若配制YMB固體培養(yǎng)基,，則加入15g 瓊脂粉,。

● TY配方（1L）：

      Tryptone                5g

      Yeast extract          3g

      補水到1L體積，*溶解后,，121度、20分鐘高溫滅菌

      配制1M的氯化鈣水溶液,，121度,、20分鐘高溫滅菌

      每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可,。

      若配制TY固體培養(yǎng)基,，則加入15g 瓊脂粉。

注意事項

1. ATCC15834生長緩慢,，轉化質粒的ATCC15834菌涂布在含抗生素的平板上應生長72小時。

2. 加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10,；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降,；質粒增大一倍,，轉化效率下降一個數(shù)量級。

3. 電轉感受態(tài)細胞中不可混入氣泡,，轉化高濃度的質?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

4. 平板上陽性克隆密度過大時,，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢,，菌落變小,，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量或終用于涂板的菌量,。