Ar.Qual電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86113-01(10×100ul)/BFNC86113-02(50×100ul)
Ar.Qual Electro：                                                         50μl/支
pCAMBIA2301（control vector,，10ng/μl )：                 10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                          -80℃（12個(gè)月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes (str^R,Cam^R ) Ar Qual Ri (agropine type)

產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。Ar.Qual發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,，具有廣泛的宿主范圍（玉米,，煙草，番茄,，柑橘等）,，同時(shí)具有鏈霉素，氯霉素抗性,。

青旗生物生產(chǎn)的Ar.Qual發(fā)根農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒 (size:11633 bp)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>10⁵ cfu/μg DNA,；經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒（size:40 kb）檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×10³ cfu/μg DNA。

常規(guī)操作方法

1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,，待其瀝干水分,，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā),，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,，冰中靜置5分鐘充分降溫,。

2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化,，加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（體積不大于6ul,，盡量用試劑盒抽提，雙蒸水溶解,；轉(zhuǎn)化效率較高,，*使用前盡量做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量），用手bo打管底混勻,，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?；旌衔锟焖僖频诫姄舯?，蓋上杯蓋，空管保留待用,。

3. 啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀,，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm,，V=2400 V（此參數(shù)為Biorad 推薦,，使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作）,，將電擊杯從冰中拿出，吸水紙吸干外表面水份,，快速放入電轉(zhuǎn)槽中,，啟動(dòng)電擊，電擊完成快速插入冰中,，加入1 ml無抗生素的TY,，并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí),。

4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的TY平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天

Ar.Qual電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：

常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗,；S：敏感,。)

● TY配方（1L）：

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補(bǔ)水到1L體積，*溶解后,，121度,、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液，121度,、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營(yíng)養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可,。

若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉,。

注意事項(xiàng)

1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10,；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降,；質(zhì)粒增大一倍,，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。

2. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡,，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過大時(shí),，由于營(yíng)養(yǎng)不足,，陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落,，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或終用于涂板的菌量,。

4.  Ar.Qual具有鏈霉素、氯霉素抗性,，不可用于具有鏈霉素抗性或氯霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化,。