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犬臍帶間充質(zhì)干原代細胞
犬臍帶間充質(zhì)干細胞分離自臍帶,；臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu),。原來是由羊膜包卷著卵黃囊和尿膜的柄狀伸長部而形成的,。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈,。當卵黃囊及其血管退化,，臍動脈和臍靜脈就發(fā)達起來，在這些間隙中可以看到疏松的膠狀的間充質(zhì),。在子宮中,，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2,，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換,。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒,。后由子宮靜脈將來自胎兒的代謝廢物運走,，某種激素和抗體等也通過臍帶從母體移交給胎兒。臍帶中含有大量的干細胞,，干細胞是生命的種子,，它會分化成機體的各種細胞，結(jié)出各種不同的果實——血液細胞,、細胞,、骨骼細胞等。干細胞是具有自我更新,、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體,；這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數(shù)量，又可進一步分化為各種組織細胞,，從而在組織修復等方面發(fā)揮積極作用,。間充質(zhì)干細胞（MSC）是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞。在不同的誘導條件下,，可分化為多種造血細胞以外的組織細胞,，并具有造血支持、免疫調(diào)節(jié),、組織修復等作用,；目前，多用于風濕免疫疾病的治療,。間充質(zhì)干細胞（MSCs）是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞,，存在于骨髓、脂肪組織,、臍血及多種胎兒組織,。它可分泌多種細胞因子及生長因子，促進造血干細胞（HSC）的增殖與分化,。MSCs還具有免疫調(diào)節(jié),、抗炎和組織修復作用,，可減輕移植物抗宿主?。?span>GVHD）及其他移植相關(guān)并發(fā)癥。
英文名稱 | Dog Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells | 組織來源 | 臍帶 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8287 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：犬臍帶間充質(zhì)干細胞
組織來源：臍帶
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS,、EGF,、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
犬臍帶間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的犬臍帶間充質(zhì)干采用組織貼塊法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的犬臍帶間充質(zhì)干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
CL-0174NRK-52E(大鼠腎小管導管上皮細胞)5×106cells/瓶×2 | 核突觸蛋白α+β抗體 |
X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗體 | 細胞因子誘導凋亡抑制因子1 |
免疫球蛋白j鏈抗體 | 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 |
損傷分子1抗體（甲型肝炎病毒細胞受體1） | 驅(qū)動蛋白家族蛋白3抗體 |
血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體 | 鉀通道蛋白1抗體 |
MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞 | CL-0177OS-RC-2(人腎癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
Saos-2,，人成骨肉瘤細胞 高分化鼻咽癌細胞,，CNE-1細胞 RBL-2H3(白血病細胞) | 人結(jié)直腸腺癌細胞;LS 174T [LS174T] |
大鼠牙細胞培養(yǎng)基 100mL | IL36G Protein Human 重組人 IL36G / IL1F9 蛋白 (aa 18-169, His 標簽) |
BABL/C2 BABL/C小鼠胚胎細胞 | 豹貓肌肉成纖維樣細胞;LCM4 |
PIEC豬髖動脈內(nèi)皮細胞 PIEC pig iliac artery endothelial cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS | 犬臍帶間充質(zhì)干原代細胞凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 |
BPH-1, 人前列腺增生細胞 Human | CSF1R Others Rat 大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細胞裂解液 (陽性對照) |
HET-1A, 人食管上皮細胞 人腎上腺皮質(zhì)瘤，SW13細胞 Ca Ski(人小腸頸部表皮樣癌細胞) | 大鼠黑質(zhì)元RN-sn |
草魚肝臟細胞;L8824 | 鐵氧化還原蛋白還原酶抗體 |
鈣粘附蛋白-11抗體 | 小鼠海馬膠質(zhì)細胞(EGFP標記) |
運動元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗體 | 補體C1qTNF9鏈多肽抗體 |
離子通道蛋白Kv3.1抗體 | MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞 |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
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