詳細(xì)介紹
NRK-52E大鼠腎細(xì)胞系來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。 細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個月,。 隨后,,不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法從單個細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞,,并三次用軟瓊脂亞克隆,。 細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性,吞噬酵母多糖和銅綠,,非特異性脂酶活性,,F(xiàn)c受體,,氧化降解,;分泌IL-1, TNF beta和IL-6,可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子,。 NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素,,分泌TGF beta前體。在博萊霉素刺激下,,TGF beta mRNA表達(dá)也上升,。 細(xì)胞對內(nèi)毒素敏感。 1-10 鈉克/毫升的LPS水平抑制增生達(dá)50%,。 即使達(dá)到0.001毫克/毫升的水平,,LPS抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆的,。 NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來源,可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性
規(guī)格:5×105cells/瓶
培養(yǎng)條件:37℃,,5% CO2,,PH值7.2~7.4,無菌恒溫培養(yǎng),。
細(xì)胞數(shù)量:1× 106個
細(xì)胞傳代:1:4~1:6傳代,;每周換液2~3次
細(xì)胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細(xì)胞檢測:細(xì)胞不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:DMEM(高糖) +10% FBS,;37℃,5% CO2
傳代方法:建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
細(xì)胞凍存:液氮凍存?????
T25瓶細(xì)胞處理方法
收到NRK-52E大鼠腎細(xì)胞系后,,檢查外包裝是否完整,,細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題,,請即時聯(lián)系,。并進(jìn)行以下操作:
1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理,,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
3. 預(yù)熱*培養(yǎng)基(含1%雙抗)。
4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(40×,100×,200×各一張),。
5. ①若細(xì)胞密度較小,無菌操作,,去掉培養(yǎng)基,。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng),。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上,,進(jìn)行傳代。
②若細(xì)胞密度較大,,達(dá)到80%以上,,將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
注:
培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%,,建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基,。由于運輸過程中的問題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,,這時請在拍照后將懸浮的細(xì)胞即時離心,,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,。(這里是針對原來*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況,,如果原來FBS濃度是20%,可以增加到25%FBS濃度) 收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問題,,請當(dāng)天反饋并提供圖片,,且保存前三天照片以便分析。7天內(nèi)反饋,,細(xì)胞本身問題免費重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實際情況酌情處理,;7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格,不予免費售后,。