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技術(shù)文章

免疫熒光鑒定步驟

閱讀:729          發(fā)布時間:2021-6-29

為了更好的幫助客戶提供真實的原代細胞,,使用免疫熒光鑒定出提取的細胞類型,,免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體技術(shù),,是標記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種,。它是在免疫學,、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎上建立起來的一項技術(shù)。該技術(shù)的主要特點是:特異性強,、敏感性高,、速度快。 一下是賽百慷技術(shù)人員提供的免疫熒光細胞鑒定的步驟,,僅做參考:

 

1.細胞爬片

取4片玻璃片于24孔板中,,每孔加入培養(yǎng)基1mL,加入細胞0.02million個/孔,。置培養(yǎng)箱2h或過夜,。
2.固定
細胞爬片后,吸出培養(yǎng)基,,用PBS洗一遍,,加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次,。也可最后一次不吸出PBS,,放4℃過夜。
3.破膜封閉
將玻片除去水分,,置于培養(yǎng)皿支撐物上,,
玻璃片封閉液配置:0.5% Trition X-100與PBS 1:1混合,再加10% 血清,,
取50uL破膜封閉液滴于防水膜上,,將玻片上有細胞的一面蓋上2h,。
4.一抗孵育
一抗配置:抗體與PBS 1:100(200)稀釋
破膜后,取50uL一抗于防水膜上(濕盒中),,將玻片有細胞的一面蓋上置于4℃(最多可放置一周)
陰性對照組可用PBS代替一抗,。
5.二抗孵育
PBS洗3×5min/次,
二抗混合液配置:二抗:PBS=1:500
DAPI:PBS=1:1000
防水膜上滴50uL二抗混合液,,蓋上玻片,,避光,室溫放置2h,。
6.包埋

PBS洗3×5min/次,,玻片上各滴1滴Fluoromount-G,將有細胞的一面蓋上,。

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