Lwnt-3a小鼠皮下結(jié)締組織細胞系L-M（TK-） cells （ATCC CCL-1.3） 用Wnt-3A表達載體轉(zhuǎn)染并在含G418的培養(yǎng)基中篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株,。 Wnt-3A基因編碼一個有變異的信號功效分泌性糖蛋白。 Wnt基因控制胚胎發(fā)過程中的許多模式形成和生長事件,。 這些細胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白,。

Lwnt-3a小鼠皮下結(jié)締組織細胞系背景資料：

L-M(TK-) cells (ATCC CCL-1.3) 用Wnt-3A表達載體轉(zhuǎn)染并在含G418的培養(yǎng)基中篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株。 Wnt-3A基因編碼一個有變異的信號功效分泌性糖蛋白,。 Wnt基因控制胚胎發(fā)過程中的許多模式形成和生長事件,。 這些細胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。 它們是目前生產(chǎn)Wnt-3A條件培養(yǎng)基的來源,。 由于這種條件培養(yǎng)基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子,，對于涉及Wnt-3A條件培養(yǎng)基的實驗有必要用其來源細胞株(ATCC CRL-2648)作對照。

規(guī)格：5×105cells/瓶
培養(yǎng)條件：37℃,，5% CO2,，PH值7.2~7.4，無菌恒溫培養(yǎng),。
細胞數(shù)量：1× 106個
細胞傳代：1:4~1:6傳代,；每周換液2~3次
細胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細胞檢測:細胞不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:DMEM（高糖） +10% FBS,；37℃,，5% CO2
傳代方法:建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
細胞凍存：液氮凍存?????

T25瓶細胞處理方法

收到Lwnt-3a小鼠皮下結(jié)締組織細胞系后，檢查外包裝是否完整,，細胞培養(yǎng)瓶是否完好,。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系,。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部,。

2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3. 預(yù)熱*培養(yǎng)基（含1%雙抗）,。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況,，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）,。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作,，去掉培養(yǎng)基,。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng),。待細胞密度達到80%以上,，進行傳代。

②若細胞密度較大,，達到80%以上,，將細胞傳代培養(yǎng)。

注：

培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%,，建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基,。由于運輸過程中的問題，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況,，這時請在拍照后將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天,；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,。（這里是針對原來*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況，如果原來FBS濃度是20%,，可以增加到25%FBS濃度）   收到細胞后如細胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問題,，請當(dāng)天反饋并提供圖片,，且保存前三天照片以便分析。7天內(nèi)反饋,，細胞本身問題免費重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實際情況酌情處理,；7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格，不予免費售后,。