LX-2人肝星狀細(xì)胞系是1977年由Cailleau R等從一位患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的51歲黑人女性的胸腔積液中分離得到的,。雖然供體組織的G6PD等位基因雜合,，但此細(xì)胞株始終表現(xiàn)為G6PD A表型。P53基因273位密碼子存在G→A突變,，從而導(dǎo)致Arg→His替代,。每個細(xì)胞上存在1×106個EGF受體。

培養(yǎng)操作及注意事項說明

一．產(chǎn)品簡介

1,、細(xì)胞名稱：LX-2人肝星狀細(xì)胞系

2,、生長特性：    □ 貼壁   □ 懸浮   □半懸浮半貼壁

3、細(xì)胞生長條件：

培養(yǎng)條件	90%DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S
溫度	37℃
空氣條件	5% CO2,95% AIR
傳代方法	1:2傳代,，2~3天換液
凍存條件	90%FBS+10%DMSO

1:2傳代,，2~3天換液

凍存條件

90%FBS+10%DMSO

二．使用方法

1、您收到LX-2人肝星狀細(xì)胞系后,，請按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜,，放入37℃,，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

 

2,、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,，最后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4）待細(xì)胞*貼壁后,，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代,。

3,、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中,；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存,。使用程序降溫盒可直接放入-80℃,。

4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）,，快速將其置入37℃水浴中解凍,，直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中,， 1000rpm離心5min,；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸,，接種25cm2培養(yǎng)瓶,，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4）第二天,，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

 

附:

T25瓶細(xì)胞處理方法

收到細(xì)胞后,，檢查外包裝是否完整,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題,，請即時聯(lián)系,。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）,。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小,，無菌操作,，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基,。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng),。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代,。

②若細(xì)胞密度較大,，達(dá)到80%以上，將細(xì)胞傳代培養(yǎng),。

注：

培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%,，建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基。由于運(yùn)輸過程中的問題,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，這時請在拍照后將懸浮的細(xì)胞即時離心,，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天,；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,。（這里是針對原來*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況，如果原來FBS濃度是20%,，可以增加到25%FBS濃度）   收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問題,，煩請當(dāng)天盡快聯(lián)系并提供圖片，以便售后處理,。7天內(nèi)反饋,，細(xì)胞本身問題免費(fèi)重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實際情況酌情處理；7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格,，不予免費(fèi)售后