小鼠真皮成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法,、差速貼壁法，并通過上皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為T25瓶,；細胞經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

1.產(chǎn)品名稱：小鼠真皮成纖維細胞
2.組織來源：皮膚組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介：
小鼠真皮成纖維細胞分離自真皮組織,；真皮，位于表皮深層,，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起,，埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維,，使皮膚既有彈性，又有韌性,。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層,。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì),。 成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的真皮成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁*,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細胞質(zhì)透明,，細胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。真皮成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持組織的正常形態(tài),，合成和釋放細胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時大量聚集修復(fù)損傷組織。
本公司生產(chǎn)的采用先中性蛋白酶消化,、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
5.培養(yǎng)基信息：
DMEM[H],、FBS,、成纖維細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：CM-M086）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

三,、使用方法
在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，小鼠肺微血管內(nèi)皮細胞可傳3-5代；建議您收到
細胞后盡快進行相關(guān)實驗,。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2,、飽
和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準(zhǔn)備進行傳代培養(yǎng),。
3. 細胞傳代
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培
養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待
細胞回縮變圓后,，再加入5ml*培養(yǎng)基終止消化,；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2-1:3適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代,，然后補充新鮮的*
培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。
四、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，胰酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和
技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時
和我們，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問
題得到解決。
5. 只可用于科研,。

備注：由于實驗所用試劑,、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考