小鼠腎小管上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法,、差速貼壁法,，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為T25瓶,；細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

1.產(chǎn)品名稱：小鼠腎小管上皮細(xì)胞
2.組織來源：腎組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠腎小管上皮細(xì)胞分離自腎組織,；腎臟是機(jī)體的重要器官,，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物,、毒物,，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖,、蛋白質(zhì),、氨基酸,、鈉離子,、鉀離子、碳酸氫鈉等,，以調(diào)節(jié)水,、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能,，生成腎素,、促紅細(xì)胞生成素、活性維生素D3,、前列腺素,、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官,。腎臟的這些功能,，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行,。腎小管是機(jī)體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細(xì)長上皮性小管,，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用。腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分布位置和功能分成近端小管,、髓袢和遠(yuǎn)端小管三部分,；近端小管可分為直部和曲部，曲部也稱為近曲小管,，位于皮質(zhì)迷路內(nèi),，于腎小體附近高度蟠曲；遠(yuǎn)端小管曲部也稱為遠(yuǎn)曲小管,，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)。腎小管上皮細(xì)胞是腎小管外面的一層細(xì)胞,，腎小管上皮細(xì)胞的分離,、培養(yǎng)是研究腎臟疾病的一項(xiàng)重要技術(shù)，目前該細(xì)胞分離方法有酶分離法,、化學(xué)分離法篩網(wǎng)分離法,、顯微解剖分離法、流式細(xì)胞儀分離法等,。腎小管上皮細(xì)胞主要功能：①腎小管上皮細(xì)胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸,；②排泌非營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入終尿；③細(xì)胞能分泌炎癥介質(zhì)如細(xì)胞因子和趨化因子,，通過產(chǎn)生IL-8或直接趨化白細(xì)胞參與急性炎癥反應(yīng),；④移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC表達(dá)IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原，這說明腎小管上皮細(xì)胞參與腎免疫損傷的發(fā)生,。隨著對(duì)腎間質(zhì)纖維化機(jī)制研究的日漸加深,，腎小管上皮細(xì)胞（RTECs）在其中的作用日益被人們重視。因此,，提供良好的腎小管上皮細(xì)胞模型,，在腎小管間質(zhì)疾病的發(fā)病機(jī)制和治療藥物篩選的研究中是非常重要的。
本公司生產(chǎn)的采用先機(jī)械研磨過不銹鋼網(wǎng)篩分離得到腎小管,、后用膠原酶消化,，結(jié)合上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶,；細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18/PCK免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
5.培養(yǎng)基信息：
M199、FBS,、上皮細(xì)胞生長添加劑,、Hydrocortisone、Insulin,、Transferrin,、Epinephrine、Penicillin,、Streptomycin等
我們推薦使用*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：CM-M062）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基,。

三、使用方法
在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞可傳3-5代,；建議您收到
細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽
和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培
養(yǎng)瓶底后,，吸出多余胰蛋白酶消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待
細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml*培養(yǎng)基終止消化,；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2-1:3適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的*
培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。
四,、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長,，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和
技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)
和我們,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問
題得到解決,。
5. 只可用于科研。

備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑,、操作環(huán)境及操作手法的不同,，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考