人白介素2受體(IL-2R)文獻引用Elisa kit適用于以下樣本的測試

血清、血漿–組織勻漿–腹水–細胞,、培養(yǎng)上清

本試劑盒僅供研究,，不用于臨床診斷

一、實驗原理：
本試劑盒采用競爭法檢測樣本中人白介素2受體(IL-2R)文獻引用Elisa kit的含量,。向預先包被了抗體的酶標孔中加入樣本,，再加入生物素標記的識別抗原，在37℃下孵育30min,，兩者與固相抗體競爭結(jié)合形成免疫復合物,，經(jīng)PBST洗滌除去未結(jié)合的生物素抗原，然后加入親和素-HRP,，在37℃下孵育30min,，親和素-HRP與生物素抗原結(jié)合，洗滌后結(jié)合的HRP催化TMB（四甲基聯(lián)苯胺）成藍色,，隨后在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色,，在450nm波長下有吸收峰，吸光值與樣本中抗原的濃度成負相關

二,、試劑盒組成：

注：
a,、試劑盒中“樣品稀釋液”為0.05M的PBS，“終止液”為2M的H2SO4,，洗滌液為含0.15%吐溫-20的PBST,，如不夠可自行配制。
b,、不同公司的緩沖體系存在較大差異,，請勿將本試劑盒的試劑與其他公司的試劑混用以免影響實驗結(jié)果,。
c、濃縮洗滌液在低溫下會有少量鹽類析出,，稍微加溫后即會消失,，不影響使用。
 

三,、試劑盒保存
本試劑盒可以在2-8℃下保存6個月,，在-20℃下可以保存更長的時間。酶標板為真空包裝,，板條可以拆卸,，拆開以后如一次不能用完，請放入提供的密封袋中,，放入干燥劑,，2-8℃保存，在一個月之內(nèi)仍然有效,。試劑不能反復凍融,。
四、需要而未提供的試劑和器材
a,、37℃恒溫箱,。
b、標準規(guī)格酶標儀,。
c,、精密移液器及一次性吸頭
d、雙蒸水或超純水
e,、干凈的試管或Eppendof管
f,、吸水紙
g、自動洗板機或8道排槍
h,、ELISA數(shù)據(jù)處理軟件,，推薦使用ELISACalc
i、500ml燒杯的和適當量程的量筒
五,、試劑準備
a,、使用前所有試劑應置于室溫平衡至少30分鐘。
b,、本試劑盒可以直接加樣,，如濃度過高，可以進行適當比例的稀釋,，計算時應將結(jié)果乘以稀釋的倍數(shù)（建議先做預實驗,，以確定稀釋倍數(shù)）。
c,、洗滌液為25倍濃縮液,，使用前將所有洗滌液倒入500ml或1L的燒杯中,，用雙蒸水定容到500ml即為工作液。
d,、標準品的稀釋：先用標準品/樣品稀釋液漿標準品凍干粉定容到150μl,，然后漩渦混勻30秒即為標準品原液(24小時內(nèi)用完)。取5支干凈的Eppendorf管,，每管加150μl的標準品稀釋液,，分別標記上32ng/ml，16ng/ml,，8ng/ml,，4ng/ml，2ng/ml,。取150μl標準品原液加入標記32ng/ml 的管中,，混勻后同樣取出150μl,，加入下一管,，以此類推直至后一管。] （見下圖）
零孔：直接加標準品/樣品稀釋液,。

原液64ng/ml      32ng/ml     16ng/ml     8ng/ml      4ng/ml      2ng/ml
e,、生物素抗原的稀釋：低速離心，然后抽取生物素抗原稀釋液1ml到濃縮型生物素抗原中,，漩渦混勻15秒,，至凍干粉*溶解，然后將所有液體倒入稀釋液瓶中,，漩渦混勻后即為生物素抗原工作液(一周內(nèi)用完),。
f、親和素-HRP的稀釋：低速離心,，使?jié)饪s液全部沉到管底,，將濃縮親和素-HRP全部轉(zhuǎn)移到稀釋液瓶中，漩渦混勻后即為親和素-HRP工作液(一周內(nèi)用完),。
六,、樣本前處理
a、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融。
b,、血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，2000-3000轉(zhuǎn)/分,，離心 20分鐘左右。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心。
c,、血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，2000-3000轉(zhuǎn)/分,，離心 20分鐘左右,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。
d、尿液：用無菌管收集,，2000-3000轉(zhuǎn)/分,，離心 20分鐘左右。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
e、細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。2000-3000轉(zhuǎn)/分，離心 20分鐘左右,。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS (PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。2000-3000轉(zhuǎn)/分,，離心 20分鐘左右。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
f,、組織標本：切割標本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),，用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。2000-3000轉(zhuǎn)/分，離心 20分鐘左右,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。
七,、洗板方法
a、手工洗板：先洗去酶標孔中的的液體,，在吸水紙上拍干,，然后每孔加入300μl稀釋好的洗滌液，輕輕搖晃30秒,，然后甩掉,，在吸水紙上拍干，重復4-5次,。
b、洗板機洗板：洗板機洗板比較便捷,，但應操作熟練后使用,。
八、詳細操作程序
a,、使用前請先將試劑盒在室溫下平衡半小時,。
b、空白孔不加樣,，只加顯色劑A,，B和終止液用于調(diào)零。
c,、標準品孔：每孔加入稀釋好的標準品50μl,，零孔加入標準品/樣品稀釋液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl,。
d,、樣品孔：加入樣品50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl,。
e,、輕輕搖晃,，蓋上封板膜，37℃培養(yǎng)箱中孵育30min,。
f,、將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用。
g,、*次洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。
h、加入50μl親和素-HRP到標準品孔和樣品孔中,，輕輕搖晃,，蓋上封板膜，37℃培養(yǎng)箱中孵育30min,。
i,、第二次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
j,、顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘,。
k、終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
l、測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
m、計算：根據(jù)濃度和OD值算出標準曲線的回歸方程,，建議用計算軟件進行計算,，推薦使用人白介素2受體(IL-2R)文獻引用Elisa kitcalc進行計算，擬合模型選用logistic曲線（四參數(shù)）,。標曲示意圖如下：

九,，操作總結(jié)
準備試劑，樣品和標準品 

加入準備好的樣品和標準品,，生物素抗原,，37℃反應30分鐘

洗板5次，加入親和素-HRP,，37℃反應30分鐘

洗板5次,，加入顯色液A、B,，37℃顯色10分鐘

加入終止液

10分鐘之內(nèi)讀OD值

計算
10,、性能參數(shù)
a、批內(nèi)差：CV＜10%
b,、批間差：CV＜12%
c,、檢測限：0.2-60ng/ml
d、保  存：2-8℃
e,、規(guī)  格：96T/盒
f,、有效期：6個月(2-8℃)

11、問題分析

購買人白介素2受體(IL-2R)文獻引用Elisa kit聲明：1,、限于現(xiàn)有條件及科技水平,，尚不能對所有原料進行全面分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風險,。
2,、終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關操作及當時的實驗環(huán)境密切相關,，請務必準備充足的待測樣本并預留備份，并根據(jù)預實驗結(jié)果調(diào)整樣本濃度,。
3,、試驗中請穿著實驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液樣品時,，請按國家生物試驗室安全防護條例執(zhí)行,。