詳細介紹
大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)Elisa試劑盒ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,,又保留酶的活性。在測定時,,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體,,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析,。
規(guī)格:48T 96T
檢 測 范 圍 :7pg/ml-220pg/ml
使 用 目 的 :本試劑盒用于測定山羊血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中小反芻獸疫抗體(PPRAb)含量。
標 本 要 求
1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)Elisa試劑盒試劑及試劑配制
1. 抗原及酶標記抗體
①抗原: IgG
②酶標抗抗體:羊抗鼠IgG-HRP
2.包被液(CBS):Na2CO3 0.8g,,NaHCO3 1.46g,,水溶解,定容500ml,。
3. 封閉液(3%BSA+CBS 或5%牛奶+CBS):含3%牛血清白蛋白(BSA):10mL CBS中加入0.3g BSA,。含5%荷蘭牛奶:10mL CBS中加入0.5g牛奶 。
4. 洗滌液(PBST 10*):KH2PO4 4g,,Na2HPO4·12H2O 58g,,NaCl 160g, KCl 4g,,Tween-20 10mL 加水定容2L,。
5. 洗滌液(1*PBS): PBST:H2O=1:9
6. 底物溶液(4甲基酰苯氨) ①TMB底物緩沖液(0.005mol/LPH3.6醋酸鈉-檸檬酸緩沖液):稱NaAc·3H2O:1.13g,C6H8O7·H2O :1.05g,,用蒸餾水溶解,,定容至1000mL,調(diào)PH=3.6,。 ② TMB底物液:稱3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)0.08g 溶于40mL 二甲基亞砜(DMSO)中,,加60 mL 甲醇,混勻,,加100mL 底物緩沖液,,在暗處避光攪拌2小時至溶解,4℃避光保存,。 ③H2O2 底物液:取140μL過氧化氫(H2O2)加入200mL底物緩沖液混勻,。 ④底物應(yīng)用液:現(xiàn)用現(xiàn)配,TMB:H2O2=1:1混勻,。
7. 終止液:2mol/L H2SO4
大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)Elisa試劑盒操作步驟
①抗原包被過夜(12h以上): IgG抗原,,用包被液(CBS)稀釋,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中,。4℃放置過夜,。 抗原用量:0.1μg*100N/抗原濃度 (N為板數(shù))
②封閉:棄上清 加300μL/孔封閉液,37℃放置2h,。
③洗滌:用洗滌液洗3次
④加一抗(待測樣品為細胞培養(yǎng)上清):將含單克降抗體的細胞培養(yǎng)上清100μL /孔加到已包被的板上,,空白培養(yǎng)基作為陰性對照,已知樣品血清(1:200稀釋于1%BSA+PBST中)作為陽性對照,。37℃恒溫箱溫育2h,。 測免疫效價待測樣品為小鼠血清時:采小鼠血液于常溫20min左右后放4℃至析出血清,3000r 10min離心,。將含抗體的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST連續(xù)倍比稀釋(按照1:200開始),,100μL /孔。每個樣品平行做兩份,,小鼠陰性血清或空白培養(yǎng)基作為陰性對照,,已知樣品作為陽性對照,。37℃恒溫箱溫育2h。
⑤洗滌:用洗滌液洗5次,。
⑥加二抗(酶標抗抗體):羊抗鼠IgG-HRP,,用1%BSA+PBST l :10000稀釋,100μL/孔,, 37℃恒溫箱溫育1h,。
⑦洗滌:用洗滌液洗5次,
⑧顯色:加新鮮配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔,,37℃恒溫箱放置10min,,顯示藍色。
⑨終止反應(yīng),、比色:加30μL/孔H2SO4終止液.顏色變黃,;用酶標儀測定450nm 630nm處各孔的吸光值,,陽性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測樣品的效價,。
大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)Elisa試劑盒相關(guān)產(chǎn)品如下:
人胚腎細胞 293T
人卵巢癌細胞 3AO
人膀胱癌細胞 5637
人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細胞系 5-8F
人腎細胞腺癌細胞 769-P
人腎透明細胞癌細胞 786-O
人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞 95-D
人膠質(zhì)母細胞瘤細胞 A172
人橫紋肌肉瘤細胞 A-204
人卵巢癌細胞 A2780
人T淋巴細胞白血病細胞 A3
人惡性黑色素瘤細胞 A375
人惡性黑色素瘤細胞 A375-EGFP
人皮膚黑色素瘤細胞 A375
人表皮癌細胞 A431(A-431)
人腎癌細胞 A498
人肺癌細胞 A549
人橫紋肌瘤細胞 A673
人黑色素瘤細胞 A875
人腎細胞腺癌細胞 ACHN
人胃腺癌細胞 AGS
人子宮內(nèi)膜腺癌細胞 AN3 CA
人視網(wǎng)膜色素上皮細胞 ARPE-19
人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細胞 AsPC-1
人肝癌細胞 Bel-7402
人肝癌細胞氟尿嘧啶耐藥株 Bel7402/Fu
人肝癌細胞 Bel-7405
人乳腺導(dǎo)管癌細胞 BT-474
人乳腺導(dǎo)管癌細胞 BT-549
人膀胱癌細胞 BT-B
人膀胱癌細胞 BT-B
人原位胰腺腺癌細胞 BxPC-3
人宮頸癌細胞 C-33A
人結(jié)腸腺癌細胞 Caco-2
人肺癌細胞 Calu-1
人肺腺癌細胞 Calu-3
人退行性癌細胞 calu-6
人胰腺癌細胞 Capan-1
人胰腺癌細胞 Capan-2
人宮頸癌細胞 CaSKi
人急性淋巴細胞白血病細胞 CCRF-CEM
人急性淋巴細胞白血病細胞 CEM/C1
HeLa [Chang Liver] Chang Liver