大鼠骨粘連蛋白(ON)Elisa試劑盒ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,，又保留酶的活性。在測定時,，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應,。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體,，也通過反應而結合在固相載體上,。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析,。

規(guī)格：48T   96T

檢 測 范 圍 ：7pg/ml-220pg/ml
使 用 目 的 ：本試劑盒用于測定山羊血清,、血漿及相關液體樣本中小反芻獸疫抗體(PPRAb)含量。

標 本 要 求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

大鼠骨粘連蛋白(ON)Elisa試劑盒試劑及試劑配制
 1. 抗原及酶標記抗體 
①抗原： IgG 
②酶標抗抗體：羊抗鼠IgG-HRP 
2.包被液（CBS）：Na2CO3   0.8g，NaHCO3  1.46g,，水溶解,，定容500ml。  
3. 封閉液（3％BSA+CBS 或5％牛奶+CBS）：含3％牛血清白蛋白（BSA）：10mL CBS中加入0.3g BSA,。含5％荷蘭牛奶：10mL CBS中加入0.5g牛奶 ,。 
4. 洗滌液（PBST 10*）：KH2PO4   4g，Na2HPO4·12H2O    58g,，NaCl   160g,， KCl  4g，Tween-20 10mL  加水定容2L,。  
5. 洗滌液(1*PBS)： PBST：H2O=1：9 
6. 底物溶液（4甲基酰苯氨） ①TMB底物緩沖液(0.005mol/LPH3.6醋酸鈉-檸檬酸緩沖液)：稱NaAc·3H2O：1.13g,，C6H8O7·H2O ：1.05g,，用蒸餾水溶解，定容至1000mL,，調PH=3.6,。 ② TMB底物液：稱3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）0.08g 溶于40mL 二甲基亞砜（DMSO）中，加60 mL 甲醇,，混勻,，加100mL 底物緩沖液，在暗處避光攪拌2小時至溶解,，4℃避光保存,。 ③H2O2 底物液：取140μL過氧化氫（H2O2）加入200mL底物緩沖液混勻。 ④底物應用液：現(xiàn)用現(xiàn)配,，TMB:H2O2=1:1混勻,。 
7. 終止液：2mol/L H2SO4 

四、大鼠骨粘連蛋白(ON)Elisa試劑盒操作步驟
 ①抗原包被過夜（12h以上）： IgG抗原,，用包被液（CBS）稀釋,，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應板中。4℃放置過夜,。 抗原用量：0.1μg*100N/抗原濃度 （N為板數(shù)）
②封閉：棄上清 加300μL/孔封閉液,，37℃放置2h。 
③洗滌：用洗滌液洗3次 
④加一抗(待測樣品為細胞培養(yǎng)上清)：將含單克降抗體的細胞培養(yǎng)上清100μL /孔加到已包被的板上,，空白培養(yǎng)基作為陰性對照,，已知樣品血清（1：200稀釋于1%BSA+PBST中）作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h,。 測免疫效價待測樣品為小鼠血清時：采小鼠血液于常溫20min左右后放4℃至析出血清,，3000r 10min離心。將含抗體的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST連續(xù)倍比稀釋(按照1：200開始),，100μL /孔,。每個樣品平行做兩份，小鼠陰性血清或空白培養(yǎng)基作為陰性對照,，已知樣品作為陽性對照,。37℃恒溫箱溫育2h。 
⑤洗滌：用洗滌液洗5次,。 
⑥加二抗（酶標抗抗體）：羊抗鼠IgG-HRP,，用1%BSA+PBST l ：10000稀釋，100μL／孔,， 37℃恒溫箱溫育1h,。
⑦洗滌：用洗滌液洗5次， 
⑧顯色：加新鮮配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔，37℃恒溫箱放置10min,，顯示藍色,。 
⑨終止反應、比色：加30μL/孔H2SO4終止液．顏色變黃,；用酶標儀測定450nm  630nm處各孔的吸光值,，陽性反應的zui大稀釋度為待測樣品的效價。

大鼠骨粘連蛋白(ON)Elisa試劑盒相關產(chǎn)品如下：

小鼠原B細胞株    BAF3
小鼠胚胎成纖維細胞    BALB/3T3 clone A31
小鼠胚胎成纖維細胞    BALB/3T3 clone A31
小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株    bEnd.3
小鼠胰島素瘤胰島Beta細胞    Beta-TC-6
小鼠小膠質細胞    BV2
小鼠神經(jīng)干細胞    C17.2
小鼠成肌細胞    C2C12
小鼠結腸癌細胞    CT26
小鼠結腸癌細胞    CT26.WT
小鼠胚胎干細胞    E14
小鼠淋巴瘤細胞    EL-4
小鼠飼養(yǎng)層上皮細胞    HPT-8
小鼠海馬神經(jīng)元細胞    HT22
小鼠卵巢上皮癌細胞    ID8
小鼠單核巨噬細胞    J774A.1
小鼠成纖維細胞    L929
小鼠肺癌細胞    LLC
小鼠胰腺癌細胞    LTPA
小鼠乳腺癌高轉移細胞    MA-891
小鼠膀胱癌細胞    MB49
小鼠胚胎成骨細胞    MC3T3-E1
小鼠胚胎成纖維細胞    MEF
小鼠胚胎成纖維細胞    MEF
小鼠前胃癌細胞    MFC
小鼠肝上皮細胞    NCTC clone 1469
小鼠正常肝細胞    NCTC1469
小鼠腦神經(jīng)瘤細胞    neuro-2a
小鼠胚胎細胞    NIH/3T3
小鼠骨髓基質細胞    OP9
小鼠畸胎瘤細胞    P19
小鼠白血病細胞    P388
小鼠逆轉錄病毒包裝株    PT-67
小鼠單核巨噬細胞白血病細胞    RAW 264.7
小鼠腎癌細胞    RENCA
小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞    RGC-5
小鼠雜交瘤    SDOW-17
小鼠胚胎干細胞    SOX1-GFP
小鼠骨髓瘤細胞    Sp2/0