詳細(xì)介紹
大鼠氧化低密度脂蛋白抗體Elisa試劑盒ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,,又保留酶的活性,。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi),。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),,故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
規(guī)格:48T 96T
檢 測(cè) 范 圍 :7pg/ml-220pg/ml
使 用 目 的 :本試劑盒用于測(cè)定山羊血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中小反芻獸疫抗體(PPRAb)含量。
標(biāo) 本 要 求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性,。
大鼠氧化低密度脂蛋白抗體Elisa試劑盒試劑及試劑配制
1. 抗原及酶標(biāo)記抗體
①抗原: IgG
②酶標(biāo)抗抗體:羊抗鼠IgG-HRP
2.包被液(CBS):Na2CO3 0.8g,,NaHCO3 1.46g,水溶解,,定容500ml,。
3. 封閉液(3%BSA+CBS 或5%牛奶+CBS):含3%牛血清白蛋白(BSA):10mL CBS中加入0.3g BSA。含5%荷蘭牛奶:10mL CBS中加入0.5g牛奶 ,。
4. 洗滌液(PBST 10*):KH2PO4 4g,,Na2HPO4·12H2O 58g,NaCl 160g,, KCl 4g,,Tween-20 10mL 加水定容2L。
5. 洗滌液(1*PBS): PBST:H2O=1:9
6. 底物溶液(4甲基酰苯氨) ①TMB底物緩沖液(0.005mol/LPH3.6醋酸鈉-檸檬酸緩沖液):稱NaAc·3H2O:1.13g,,C6H8O7·H2O :1.05g,,用蒸餾水溶解,定容至1000mL,,調(diào)PH=3.6,。 ② TMB底物液:稱3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)0.08g 溶于40mL 二甲基亞砜(DMSO)中,,加60 mL 甲醇,混勻,,加100mL 底物緩沖液,,在暗處避光攪拌2小時(shí)至溶解,4℃避光保存,。 ③H2O2 底物液:取140μL過(guò)氧化氫(H2O2)加入200mL底物緩沖液混勻,。 ④底物應(yīng)用液:現(xiàn)用現(xiàn)配,TMB:H2O2=1:1混勻,。
7. 終止液:2mol/L H2SO4
四,、大鼠氧化低密度脂蛋白抗體Elisa試劑盒操作步驟
①抗原包被過(guò)夜(12h以上): IgG抗原,用包被液(CBS)稀釋,,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中,。4℃放置過(guò)夜。 抗原用量:0.1μg*100N/抗原濃度 (N為板數(shù))
②封閉:棄上清 加300μL/孔封閉液,,37℃放置2h,。
③洗滌:用洗滌液洗3次
④加一抗(待測(cè)樣品為細(xì)胞培養(yǎng)上清):將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清100μL /孔加到已包被的板上,空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照,,已知樣品血清(1:200稀釋于1%BSA+PBST中)作為陽(yáng)性對(duì)照,。37℃恒溫箱溫育2h。 測(cè)免疫效價(jià)待測(cè)樣品為小鼠血清時(shí):采小鼠血液于常溫20min左右后放4℃至析出血清,,3000r 10min離心,。將含抗體的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST連續(xù)倍比稀釋(按照1:200開(kāi)始),100μL /孔,。每個(gè)樣品平行做兩份,,小鼠陰性血清或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照,已知樣品作為陽(yáng)性對(duì)照,。37℃恒溫箱溫育2h,。
⑤洗滌:用洗滌液洗5次。
⑥加二抗(酶標(biāo)抗抗體):羊抗鼠IgG-HRP,,用1%BSA+PBST l :10000稀釋,,100μL/孔, 37℃恒溫箱溫育1h,。
⑦洗滌:用洗滌液洗5次,,
⑧顯色:加新鮮配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔,37℃恒溫箱放置10min,,顯示藍(lán)色,。
⑨終止反應(yīng)、比色:加30μL/孔H2SO4終止液.顏色變黃,;用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm 630nm處各孔的吸光值,,陽(yáng)性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測(cè)樣品的效價(jià),。
大鼠氧化低密度脂蛋白抗體Elisa試劑盒相關(guān)產(chǎn)品如下:
小鼠原B細(xì)胞株 BAF3
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 BALB/3T3 clone A31
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 BALB/3T3 clone A31
小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株 bEnd.3
小鼠胰島素瘤胰島Beta細(xì)胞 Beta-TC-6
小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 BV2
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞 C17.2
小鼠成肌細(xì)胞 C2C12
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 CT26
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 CT26.WT
小鼠胚胎干細(xì)胞 E14
小鼠淋巴瘤細(xì)胞 EL-4
小鼠飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞 HPT-8
小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞 HT22
小鼠卵巢上皮癌細(xì)胞 ID8
小鼠單核巨噬細(xì)胞 J774A.1
小鼠成纖維細(xì)胞 L929
小鼠肺癌細(xì)胞 LLC
小鼠胰腺癌細(xì)胞 LTPA
小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 MA-891
小鼠膀胱癌細(xì)胞 MB49
小鼠胚胎成骨細(xì)胞 MC3T3-E1
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 MEF
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 MEF
小鼠前胃癌細(xì)胞 MFC
小鼠肝上皮細(xì)胞 NCTC clone 1469
小鼠正常肝細(xì)胞 NCTC1469
小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞 neuro-2a
小鼠胚胎細(xì)胞 NIH/3T3
小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 OP9
小鼠畸胎瘤細(xì)胞 P19
小鼠白血病細(xì)胞 P388
小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝株 PT-67
小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 RAW 264.7
小鼠腎癌細(xì)胞 RENCA
小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 RGC-5
小鼠雜交瘤 SDOW-17
小鼠胚胎干細(xì)胞 SOX1-GFP
小鼠骨髓瘤細(xì)胞 Sp2/0