人褪黑素（MT）Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測樣品中靶蛋白的的濃度,，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上,，當(dāng)加入標準品或樣品時,，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后,，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合,，形成夾心的免疫復(fù)合物

人褪黑素(MT)Elisa試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后，3000
轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融,，
在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
人褪黑素(MT)Elisa試劑盒1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這
屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。
3. 濃度為0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白,；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5
倍，zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實際濃度,。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻,。
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋,，即1 份的20×洗滌緩沖液加19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍
干,，如此洗板5 次,。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min,，洗板5 次,。
人褪黑素(MT)Elisa試劑盒操作步驟
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL,；空白孔不加,。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100
μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，
如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機洗板）,。
6. 每孔加入底物A,、B 各50μL，37℃避光孵育15min,。
7. 每孔加入終止液50μL,，15min 內(nèi),，在450nm 波長處測定各孔的OD 值,。
結(jié)果判斷

繪制標準曲線：在Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標,，對應(yīng)OD 值作縱坐標,，繪制出
標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值,。

人褪黑素(MT)Elisa試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值,，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1 U/ml,。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%,。
5. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存。
6. 有效期：6 個月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實驗或人體實驗,，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗
者承擔(dān),，本公司概不負責(zé),。
2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān),。