人黃體生成素釋放激素（LHRH）Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測樣品中靶蛋白的的濃度,，其原理見圖2,。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時,，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合,。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合,，形成夾心的免疫復(fù)合物

人黃體生成素釋放激素(LHRH)Elisa試劑盒的組成
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：    
（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）,；    
（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；    
（3）酶的底物,；    
（4） 陰性對照品和陽性對照品（定性測定中）,，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測定中）；    
（5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液,；    
（6）洗滌液,，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水,；    
（7）酶反應(yīng)終止液,，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的zui終體積而異,，在板式ELISA中一般采用2mol/L,。    
二、人黃體生成素釋放激素(LHRH)Elisa試劑盒的包被方式
將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating),。換言之,，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于,。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量,、等電點,、濃度等的影響,。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),，故更易吸附到固相載體表面,。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,，抗體結(jié)合點暴露于外,，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被,。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時,，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下,，直接包被效果不佳,，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被,，其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化,。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露,。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗的特異性,、敏感性均由此得以改善,，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點是抗原用量少,，僅為直接包被的1/10乃至于/100,。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如,，在檢測抗DNA抗體時,，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合,?？蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12h）,，以增加其吸附性能,。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸,、魚精蛋白等作預(yù)包被,，也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素生物素系統(tǒng)作間接包被,，即用親和素先包被載體,，然后加入生物素化的DNA,，這種包被方法均勻、牢固,，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定,。    
脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合，可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中,，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干,，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面,?？剐牧字贵w的ELISA試劑一般采用這種包被方式,。    
三,、人黃體生成素釋放激素(LHRH)Elisa試劑盒的包被條件與封閉
包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時間,，包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗的特點和材料的性質(zhì)而選定,。抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的,。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置過夜,，37℃中保溫2h被認(rèn)為具有同等的包被效果,。包被的zui適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定,。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/mL-20ug/mL,。    
封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程?？乖蚩贵w包被時所用的濃度較低,，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙，封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,，從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。封閉的手續(xù)與包被相類似。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,，也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的,。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑，其zui大的特點是價廉,，可以高濃度使用（5%）,。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用，但由于奶粉的成份復(fù)雜,，而且封閉后的載體不易長期保存,，因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用,。    
封閉是否必要，取決于ELISA的模式及具體的實驗條件,。并非所有的ELISA固相均需封閉,，封閉不當(dāng)反而會使陰性本底增高。一般說來,，雙抗體夾心法,，只要酶標(biāo)記物是高活性的，操作時洗滌*,，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果,。特別是用單抗腹水直接包被時，因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面,，業(yè)已起到了類似封閉劑的作用,。但在間接法測定中，封閉一般是不可少的,。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中,，在低溫可保存數(shù)月。