詳細介紹
人利什曼原蟲抗體Elisa試劑盒是一種敏感性高,特異性強,,重復性好的實驗方法,。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,,操作簡便,,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中,。
實驗原理:
上海雅吉生物試劑盒檢測方法有:雙抗體夾心法、間接法,、競爭法
標本要求
1.血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。
2.血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成應再次離心。
3.尿液:
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實行,。
4.細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。
5.培養(yǎng)細胞:
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心,。
6.組織標本:
切割標本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。
7.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
8.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟
標準品的稀釋:人利什曼原蟲抗體Elisa試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
2000pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
1000pg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
500pg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
250pg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
125pg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外,。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5,。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:以空白空調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,,即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,,板條應裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結果,。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,,以避免試驗誤差,。一次加樣時間很好控制在5分鐘內,如標本數量多,,推薦使用排槍加樣,。
請每次測定的同時做標準曲線,很好做復孔,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:,;2-8℃。
2.有效期:6個月
本說明書48T同樣適用
上海雅吉生物ELISA試劑盒特點體現:
一,、高效,、靈敏、特異---采用全進口材料和抗體
二,、穩(wěn)定的重復性和可靠性---的科技水平
三,、吸附性能好,空白值低,,孔底透明度高的固相載體---嚴格的生產流程和規(guī)范操作
ELISA試劑盒適用范圍:
一.適用血清,、血漿、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標本類型;
二.可檢測動物類型豐富:人,、猴,、大鼠、小鼠,、豚鼠,、兔、豬,、犬,、牛、綿羊,、雞,、蝦、魚等
三.可檢測指標齊全:白介素,,干擾素,,血管緊張素,肺炎衣原體,趨化因子,、生長因子基質金屬蛋白酶,、炎癥因子、血管生成素 等等 指標
免費代測服務:
1.每個指標需提供100微升樣品,,如做復孔則200微升
2,、標本離心處理后請使用泡沫箱加冰袋郵寄至我司;
2,、樣本在一周內使用,,保存條件2-8度;
3,、代測服務只反饋實驗結果原數據信息,,不再提供相應試劑盒;
4,、需支付相應試劑盒費用,,代測不產生任何費用;
上海雅吉生物科技有限公司坐落于上海松江科技技園區(qū),,現擁有來自人,、小鼠、大鼠,、兔,、豬等種屬的試劑盒5000余種,還可根據客戶要求定做試劑盒,,提供免費代測服務,。質量好,,使我們擁有*的客戶,;價格低,薄利多銷是我們生存的優(yōu)勢?,;服務好,,讓我們在業(yè)界擁有很好的口碑。我們將一如既往堅持質量*,,誠信為本的理念,。?感謝新老客戶的博愛!,!
上海雅吉生物科技有限公司鄭重承諾
凡購買本公司試劑盒有非人為質量問題,,收貨后十五個工作日內包退換
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