人輪狀病毒抗原（RV-Ag）Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測(cè)樣品中靶蛋白的的濃度,，其原理見(jiàn)圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上,，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí),，其中的靶蛋白會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后,，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合,，形成夾心的免疫復(fù)合物

人輪狀病毒抗原(RV-Ag)Elisa試劑盒是一種敏感性高，特異性強(qiáng),，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)方法,。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,，操作簡(jiǎn)便,，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,。
實(shí)驗(yàn)原理： 
 上海雅吉生物試劑盒檢測(cè)方法有:雙抗體夾心法,、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法

標(biāo)本要求 
1.血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
2.血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心,。
3.尿液：
用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照此實(shí)行,。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。
5.培養(yǎng)細(xì)胞:
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
6.組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后,，稱(chēng)取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用。
7.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
8.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)?/span>人輪狀病毒抗原(RV-Ag)Elisa試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2000pg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1000pg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
500pg/ml    3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
250pg/ml    2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
125pg/ml    1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。 
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5,。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。

人輪狀病毒抗原(RV-Ag)Elisa試劑盒
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間很好控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，很好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請(qǐng)避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6個(gè)月
本說(shuō)明書(shū)48T同樣適用

上海雅吉生物ELISA試劑盒特點(diǎn)體現(xiàn)：

       一、高效,、靈敏,、特異---采用全進(jìn)口材料和抗體

  二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性---的科技水平

  三,、吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高的固相載體---嚴(yán)格的生產(chǎn)流程和規(guī)范操作

ELISA試劑盒適用范圍：

一．適用血清,、血漿,、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型,；

二．可檢測(cè)動(dòng)物類(lèi)型豐富：人、猴,、大鼠,、小鼠、豚鼠,、兔,、豬、犬,、牛,、綿羊、雞,、蝦,、魚(yú)等

三．可檢測(cè)指標(biāo)齊全：白介素，干擾素,，血管緊張素,，肺炎衣原體，趨化因子,、生長(zhǎng)因子基質(zhì)金屬蛋白酶,、炎癥因子、血管生成素 等等 指標(biāo)

人輪狀病毒抗原(RV-Ag)Elisa試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)：

1.每個(gè)指標(biāo)需提供100微升樣品,，如做復(fù)孔則200微升
 
2,、標(biāo)本離心處理后請(qǐng)使用泡沫箱加冰袋郵寄至我司；
 
2,、樣本在一周內(nèi)使用,，保存條件2-8度；
 
3,、代測(cè)服務(wù)只反饋實(shí)驗(yàn)結(jié)果原數(shù)據(jù)信息,，不再提供相應(yīng)試劑盒；
 
4,、需支付相應(yīng)試劑盒費(fèi)用,，代測(cè)不產(chǎn)生任何費(fèi)用；

上海雅吉生物科技有限公司坐落于上海松江科技技園區(qū),，現(xiàn)擁有來(lái)自人,、小鼠、大鼠,、兔,、豬等種屬的試劑盒5000余種,，還可根據(jù)客戶要求定做試劑盒，提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),。質(zhì)量好,，使我們擁有*的客戶；價(jià)格低,，薄利多銷(xiāo)是我們生存的優(yōu)勢(shì)?,；服務(wù)好，讓我們?cè)跇I(yè)界擁有很好的口碑,。我們將一如既往堅(jiān)持質(zhì)量*,，誠(chéng)信為本的理念。?感謝新老客戶的博愛(ài)??！
 
         上海雅吉生物科技有限公司鄭重承諾
凡購(gòu)買(mǎi)本公司試劑盒有非人為質(zhì)量問(wèn)題，收貨后十五個(gè)工作日內(nèi)包退換