人流行性腮腺炎（EP）Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測(cè)樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2,。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上,，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的靶蛋白會(huì)與捕獲抗體結(jié)合,。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后,，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物

人流行性腮腺炎(EP)Elisa試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

使用說(shuō)明書

規(guī)格：48次,、96次

使用目的：血清,、血漿及相關(guān)液體樣本

標(biāo)本要求
標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

免疫吸附劑
已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的條件下一般可保存6個(gè)月。有些不完整的試盒,，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體,，檢測(cè)人員需自行包被。以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過(guò)程,。

固相載體
固相載體在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器，不參與化學(xué)反應(yīng),?？勺鱁LISA中載體的材料很多，zui常用的是聚苯乙烯,。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性，加之它的價(jià)格低廉,，所以被普遍采用,。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式,。
ELISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板,、小珠和小試管。以微量滴定板zui為常用,，于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,，上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同,。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),，并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè),，包括加樣,、洗滌、保溫,、比色等步驟,，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,，其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加,，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,，空白值低,，孔底透明度高，各板之間,、同一板各孔之間性能相近,。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,，因此,，每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯,。作為ELISA固相載體,，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可剪割,、價(jià)廉,，但光潔度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整,。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,，但空白值也略高。
為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣,，可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定,，然后比較結(jié)果,。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大這種載體就是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。

人流行性腮腺炎(EP)Elisa試劑盒陽(yáng)性對(duì)照品和陰性對(duì)照品

陽(yáng)性對(duì)照品(positive control)和陰性對(duì)照品(negative control)是檢驗(yàn)試驗(yàn)有效性的控
制品,，同時(shí)也作為判斷結(jié)果的對(duì)照,，因此對(duì)照品，特別是陽(yáng)性對(duì)照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測(cè)標(biāo)本的組成相*,。以人血清為標(biāo)本的測(cè)定,，對(duì)照品zui也為人血清，因?yàn)檎Ｈ搜逶诟鞣NELISA模式中可產(chǎn)生不同程度的本底,。由于大量正常人血清較難得到,，國(guó)外試劑盒中的對(duì)照品多以復(fù)鈣人血漿(recalcified human plasma)為原料，即在血漿中加入鈣離子,，使其中的纖維蛋白質(zhì)凝固,，除去凝塊后所得的液體，其組成與血清相似,。陰性對(duì)照品須先行檢測(cè),，確定其中不含待測(cè)物質(zhì),。例如HBsAg檢測(cè)的陰性對(duì)照品中不可含HBsAg，zui抗HBs也是陰性,。陽(yáng)性對(duì)照品多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì),，其中加入一定量的待檢物質(zhì)，此量zui在試劑說(shuō)明書中標(biāo)明,。加入的量應(yīng)與試劑的敏感度相稱,，在測(cè)定中得到的吸光值與受檢標(biāo)本吸光值比較，可對(duì)標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量有一個(gè)粗略的估計(jì),。國(guó)外檢測(cè)HBsAg的ELISA試劑盒檢測(cè)敏感度約為0.5ng/ml,，陽(yáng)性對(duì)照品中含量約為10ng/ml。在對(duì)照品中一般加入抗生素和防腐劑,，以利保存,。

參考標(biāo)準(zhǔn)品
定量測(cè)定的ELISA試劑盒應(yīng)含有制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用的參考標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)包括覆蓋可檢測(cè)范圍的4-6個(gè)濃度,，一般均配入含蛋白保護(hù)劑及防腐劑的緩沖液中,。

人類嗜T淋巴細(xì)胞Ⅰ型病毒Elisa試劑盒樣本前處理簡(jiǎn)介

一）樣本前處理的目的,、內(nèi)容,、重要性

1、目的

樣本處理的zui終目的是將待測(cè)組分從樣本中分離出來(lái),，并達(dá)到能夠檢測(cè)的狀態(tài),。

2、內(nèi)容

提取,、凈化是主要的兩個(gè)內(nèi)容,，也有的需要進(jìn)行濃縮甚至衍生化。

3,、重要性

      據(jù)統(tǒng)計(jì),，人們常常將60%的時(shí)間花在樣品前處理上。這不但不符合高效率的要求,，而且煩瑣的傳統(tǒng)樣品處理方法也直接影響到zui后的分析結(jié)果,。

二）殘留分析的樣品種類

    組織（肌肉、肝臟,、魚,、蝦等）、蜂蜜,、蜂王漿,、花粉、飼料及其原料,、腸衣,、熟食,、尿樣（豬尿、牛尿,、羊尿等）,、血清（牛血清、豬血清,、雞血清等）,、牛奶及奶粉、雞蛋,、糞便等,。

三）樣本前處理操作一般步驟

1、各種溶液配制

在實(shí)驗(yàn)開始前按照說(shuō)明書的要求配制出各種實(shí)驗(yàn)需要的溶液,，實(shí)驗(yàn)室已有的的溶液也應(yīng)考慮溶液的配制日期以及有效期

2,、樣本稱量/量取前的處理

有的樣本是冷凍保存，有的樣本在較低溫度時(shí)粘度較大在樣本且變得不均一,，它們稱量/量取前必須解凍或加熱,，夏天采用放置室內(nèi)解凍即可，冬天可以是防水的溫水浴解凍,，或24/37度溫箱解凍,，也可以采用暖氣片解凍，但是無(wú)論是什么樣的方式在解凍完成以后必須立即轉(zhuǎn)到室溫環(huán)境中來(lái),，以免變質(zhì),，值得一提的是某些藥物的實(shí)驗(yàn)樣本的解凍方式必須使用室溫解凍，其他的解凍方式均對(duì)結(jié)果都有很大的影響

3,、樣本稱量/量取

按照說(shuō)明書規(guī)定的量進(jìn)行稱量/量取,，對(duì)于外來(lái)復(fù)核的樣本稱量/量取應(yīng)更加的精確，當(dāng)稱量的量很少的情況下可由一般的天平轉(zhuǎn)到分析天平去稱量,，天平也要按時(shí)進(jìn)行校正部分樣本采用量取的方式取樣,，在量取前必須保證量取容器的準(zhǔn)確行；以保證樣本量準(zhǔn)確

4,、樣本提取液加入

按照說(shuō)明書給定的量和試劑/溶液的種類加入到樣本中,，量少的情況下可以用移液器進(jìn)行轉(zhuǎn)移，當(dāng)需要的試劑/溶液量較大的情況下必須用移液管,。

注:需要做添加高濃度標(biāo)準(zhǔn)品的樣本,在加入提取液之前加入高濃度標(biāo)準(zhǔn)品

5,、震/振搖

該步驟有兩種方式，一種為長(zhǎng)時(shí)間的使用震蕩器上震蕩,，該方法可定時(shí)定量,，但對(duì)于某些實(shí)驗(yàn)不適用，另一種為較強(qiáng)烈的振蕩,，可用渦動(dòng)儀強(qiáng)烈渦動(dòng),，也可以人為的上下振蕩,。不同的實(shí)驗(yàn)對(duì)時(shí)間的要求也不同，要按照說(shuō)明書進(jìn)行

6,、離心

離心有三個(gè)影響因素,，即為離心力、時(shí)間,、溫度,，需要設(shè)定的參數(shù)就是三個(gè)參數(shù)，具體的設(shè)定方式因離心機(jī)不同而有一定的差異,，沒(méi)有條件的情況下要保證時(shí)間和離心機(jī)轉(zhuǎn)度,。

7、取液

１）取上層：這是zui為常見和zui簡(jiǎn)單的取液方式,，僅僅需要按量取就可以

２）取中間層：zui不常見的取液方式,，一般情況下是去掉全部上層再吸取中間層，對(duì)于一些經(jīng)驗(yàn)較為豐富的實(shí)驗(yàn)員在處理部分實(shí)驗(yàn)時(shí)可以直接突破上層取中間層

３）取下層：較4是像取中間那樣進(jìn)行,，值得注意的是,，所有取液方式都有可能遇到取液時(shí)液體的量越取越體積越大，甚至吸到移液器內(nèi),，對(duì)于這樣的情況在取液時(shí)注意看液體的體積達(dá)到量就不繼續(xù)吸就可以了

7,、吹干

吹干的三個(gè)影響因素為氣體、溫度,、加熱方式

氣體：較為理想的吹干氣體為氮?dú)?，出于成本?wèn)題多數(shù)小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室一般采用空氣吹干,，

溫度：根據(jù)藥物與提取溶劑的物理性質(zhì)選擇一個(gè)合適的溫度,，一般在50到60℃之間

加熱方式：一般有兩種方式，分為水浴方式和干浴

8,、復(fù)溶

吹干以后加入復(fù)溶液將藥物溶解出來(lái)的過(guò)程,，加速溶解的方式可為渦動(dòng)溶解和超聲溶解，時(shí)間時(shí)情況而定,，一般僅使用渦動(dòng)溶解

9,、樣本檢測(cè)

       該步驟的具體操作見試劑盒說(shuō)明書中的檢測(cè)步驟。

四）前處理相關(guān)試驗(yàn)術(shù)語(yǔ)及定義

1,、陰性和陽(yáng)性

陰性：即樣本中不含被檢測(cè)物質(zhì),。

陽(yáng)性：樣本中含有被檢測(cè)物質(zhì)。

2,、假陰性與假陽(yáng)性

假陰性：因某些因素的影響導(dǎo)致陽(yáng)性樣本檢測(cè)結(jié)果為陰性的現(xiàn)象,。

假陽(yáng)性：因某些因素的影響導(dǎo)致陰性樣本檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的現(xiàn)象。

3,、靈敏度：試劑盒方法能檢測(cè)到待測(cè)藥物的zui底濃度,。

4,、準(zhǔn)確度：指測(cè)定值(平均值)與真值的接近程度，表示分析結(jié)果的真實(shí)性,。通常用添加回收率來(lái)表示：

         回收率=(測(cè)定值-空白值)/添加量 ×100％

5,、精密度：指用某種方法重復(fù)測(cè)定同一均質(zhì)樣品測(cè)定值彼此接近程度，表示分析結(jié)果的重復(fù)性,，常用變異系數(shù)表示,。

6、檢測(cè)限（LOD  limit of detection）：檢測(cè)限指分析方法能夠從樣本的背景信號(hào)中檢測(cè)出待測(cè)物存在時(shí)所需的zui低濃度,。LOD反映了分析方法整體的靈敏度效能指標(biāo),。一般對(duì)分析方法在LOD水平的定量可信性（如精密度、回收率）不作要求,，一般要求殘留分析方法LOD≦0.1MRL    LOD=B+2SD或B+3SD

7,、定量限（LOQ  limit of quantitation）：指分析方法能夠?qū)悠分械拇郎y(cè)物進(jìn)行定量測(cè)定的zui低濃度，用于定量方法的驗(yàn)證,。

8,、殘留檢測(cè)限（ＭＲＬ）

規(guī)定允許食品中藥物zui高殘留量，很多情況下各國(guó)規(guī)定的ＭＲＬ值之間有一定的差異,，多數(shù)情況下我國(guó)規(guī)定的ＭＲＬ值較日本,、歐盟、美國(guó)的高一些,。

人流行性腮腺炎(EP)Elisa試劑盒基本配套儀器

 1,、微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm

2、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b置

3,、均質(zhì)器

4,、振蕩器

5、渦旋儀

6,、離心機(jī)

7,、天平：感量0.01g

8、微量移液器：?jiǎn)蔚?20ml～200ml,、100ml～1000ml

多道 250ml

9,、超聲儀

10、恒溫培養(yǎng)箱/生化培養(yǎng)箱

11,、冰箱

12,、洗板機(jī)（可選）

13、磁力攪拌器

人流行性腮腺炎(EP)Elisa試劑盒注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套,、穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解,。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮,。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。

【儲(chǔ)存及有效期】 于2～8℃避光保存,，有效期為12個(gè)月