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詳細(xì)介紹
人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)Elisa試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
使用說明書
規(guī)格：48次,、96次
使用目的：血清,、血漿及相關(guān)液體樣本
標(biāo)本要求
標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
免疫吸附劑
已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的條件下一般可保存6個(gè)月,。有些不完整的試盒，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體,，檢測(cè)人員需自行包被,。以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過程。
固相載體
固相載體在ELISA測(cè)定過程中作為吸附劑和容器,，不參與化學(xué)反應(yīng),。可作ELISA中載體的材料很多,，zui常用的是聚苯乙烯,。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性,，加之它的價(jià)格低廉,，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,，可制成各種形式,。
ELISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板,、小珠和小試管。以微量滴定板zui為常用,，于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,，上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同,。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),，并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè),，包括加樣,、洗滌、保溫,、比色等步驟,，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,，其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加,，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大,。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高,，各板之間,、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,，因此，每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其性能,。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯,。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,，可剪割,、價(jià)廉，但光潔度不如聚苯乙烯板,，孔底亦不如聚苯乙烯平整,。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高,。
為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣,，可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定,，然后比較結(jié)果,。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大這種載體就是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。
人抗硬皮病抗體70Elisa試劑盒陽性對(duì)照品和陰性對(duì)照品
陽性對(duì)照品(positive control)和陰性對(duì)照品(negative control)是檢驗(yàn)試驗(yàn)有效性的控
制品,，同時(shí)也作為判斷結(jié)果的對(duì)照,，因此對(duì)照品，特別是陽性對(duì)照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測(cè)標(biāo)本的組成相*,。以人血清為標(biāo)本的測(cè)定,，對(duì)照品zui也為人血清，因?yàn)檎Ｈ搜逶诟鞣NELISA模式中可產(chǎn)生不同程度的本底,。由于大量正常人血清較難得到,，國外試劑盒中的對(duì)照品多以復(fù)鈣人血漿(recalcified human plasma)為原料，即在血漿中加入鈣離子,，使其中的纖維蛋白質(zhì)凝固,，除去凝塊后所得的液體，其組成與血清相似,。陰性對(duì)照品須先行檢測(cè),，確定其中不含待測(cè)物質(zhì)。例如HBsAg檢測(cè)的陰性對(duì)照品中不可含HBsAg,，zui抗HBs也是陰性,。陽性對(duì)照品多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì),，其中加入一定量的待檢物質(zhì),，此量zui在試劑說明書中標(biāo)明。加入的量應(yīng)與試劑的敏感度相稱,，在測(cè)定中得到的吸光值與受檢標(biāo)本吸光值比較,，可對(duì)標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量有一個(gè)粗略的估計(jì)。國外檢測(cè)HBsAg的ELISA試劑盒檢測(cè)敏感度約為0.5ng/ml,，陽性對(duì)照品中含量約為10ng/ml,。在對(duì)照品中一般加入抗生素和防腐劑，以利保存,。
參考標(biāo)準(zhǔn)品
定量測(cè)定的ELISA試劑盒應(yīng)含有制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用的參考標(biāo)準(zhǔn)品,，應(yīng)包括覆蓋可檢測(cè)范圍的4-6個(gè)濃度，一般均配入含蛋白保護(hù)劑及防腐劑的緩沖液中,。
人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)Elisa試劑盒樣本前處理簡(jiǎn)介
一）樣本前處理的目的,、內(nèi)容、重要性
1,、目的
樣本處理的zui終目的是將待測(cè)組分從樣本中分離出來,，并達(dá)到能夠檢測(cè)的狀態(tài),。
2、內(nèi)容
提取,、凈化是主要的兩個(gè)內(nèi)容,，也有的需要進(jìn)行濃縮甚至衍生化。
3,、重要性
據(jù)統(tǒng)計(jì),，人們常常將60%的時(shí)間花在樣品前處理上。這不但不符合高效率的要求,，而且煩瑣的傳統(tǒng)樣品處理方法也直接影響到zui后的分析結(jié)果,。
二）殘留分析的樣品種類
組織（肌肉、肝臟,、魚,、蝦等）、蜂蜜,、蜂王漿,、花粉、飼料及其原料,、腸衣,、熟食、尿樣（豬尿,、牛尿,、羊尿等）、血清（牛血清,、豬血清,、雞血清等）、牛奶及奶粉,、雞蛋,、糞便等。
三）樣本前處理操作一般步驟
1,、各種溶液配制
在實(shí)驗(yàn)開始前按照說明書的要求配制出各種實(shí)驗(yàn)需要的溶液,，實(shí)驗(yàn)室已有的的溶液也應(yīng)考慮溶液的配制日期以及有效期
2、樣本稱量/量取前的處理
有的樣本是冷凍保存,，有的樣本在較低溫度時(shí)粘度較大在樣本且變得不均一,，它們稱量/量取前必須解凍或加熱，夏天采用放置室內(nèi)解凍即可,，冬天可以是防水的溫水浴解凍,，或24/37度溫箱解凍，也可以采用暖氣片解凍,，但是無論是什么樣的方式在解凍完成以后必須立即轉(zhuǎn)到室溫環(huán)境中來,，以免變質(zhì),，值得一提的是某些藥物的實(shí)驗(yàn)樣本的解凍方式必須使用室溫解凍，其他的解凍方式均對(duì)結(jié)果都有很大的影響
3,、樣本稱量/量取
按照說明書規(guī)定的量進(jìn)行稱量/量取,，對(duì)于外來復(fù)核的樣本稱量/量取應(yīng)更加的精確，當(dāng)稱量的量很少的情況下可由一般的天平轉(zhuǎn)到分析天平去稱量,，天平也要按時(shí)進(jìn)行校正部分樣本采用量取的方式取樣,，在量取前必須保證量取容器的準(zhǔn)確行；以保證樣本量準(zhǔn)確
4,、樣本提取液加入
按照說明書給定的量和試劑/溶液的種類加入到樣本中,，量少的情況下可以用移液器進(jìn)行轉(zhuǎn)移，當(dāng)需要的試劑/溶液量較大的情況下必須用移液管,。
注:需要做添加高濃度標(biāo)準(zhǔn)品的樣本,在加入提取液之前加入高濃度標(biāo)準(zhǔn)品
5,、震/振搖
該步驟有兩種方式，一種為長時(shí)間的使用震蕩器上震蕩,，該方法可定時(shí)定量,，但對(duì)于某些實(shí)驗(yàn)不適用，另一種為較強(qiáng)烈的振蕩,，可用渦動(dòng)儀強(qiáng)烈渦動(dòng),，也可以人為的上下振蕩。不同的實(shí)驗(yàn)對(duì)時(shí)間的要求也不同,，要按照說明書進(jìn)行
6,、離心
離心有三個(gè)影響因素，即為離心力,、時(shí)間,、溫度，需要設(shè)定的參數(shù)就是三個(gè)參數(shù),，具體的設(shè)定方式因離心機(jī)不同而有一定的差異,，沒有條件的情況下要保證時(shí)間和離心機(jī)轉(zhuǎn)度,。
7,、取液
１）取上層：這是zui為常見和zui簡(jiǎn)單的取液方式，僅僅需要按量取就可以
２）取中間層：zui不常見的取液方式,，一般情況下是去掉全部上層再吸取中間層,，對(duì)于一些經(jīng)驗(yàn)較為豐富的實(shí)驗(yàn)員在處理部分實(shí)驗(yàn)時(shí)可以直接突破上層取中間層
３）取下層：較4是像取中間那樣進(jìn)行，值得注意的是,，所有取液方式都有可能遇到取液時(shí)液體的量越取越體積越大,，甚至吸到移液器內(nèi)，對(duì)于這樣的情況在取液時(shí)注意看液體的體積達(dá)到量就不繼續(xù)吸就可以了
7,、吹干
吹干的三個(gè)影響因素為氣體,、溫度,、加熱方式
氣體：較為理想的吹干氣體為氮?dú)猓鲇诔杀締栴}多數(shù)小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室一般采用空氣吹干,，
溫度：根據(jù)藥物與提取溶劑的物理性質(zhì)選擇一個(gè)合適的溫度,，一般在50到60℃之間
加熱方式：一般有兩種方式，分為水浴方式和干浴
8,、復(fù)溶
吹干以后加入復(fù)溶液將藥物溶解出來的過程,，加速溶解的方式可為渦動(dòng)溶解和超聲溶解，時(shí)間時(shí)情況而定,，一般僅使用渦動(dòng)溶解
9,、樣本檢測(cè)
該步驟的具體操作見試劑盒說明書中的檢測(cè)步驟。
四）前處理相關(guān)試驗(yàn)術(shù)語及定義
1,、陰性和陽性
陰性：即樣本中不含被檢測(cè)物質(zhì),。
陽性：樣本中含有被檢測(cè)物質(zhì)。
2,、假陰性與假陽性
假陰性：因某些因素的影響導(dǎo)致陽性樣本檢測(cè)結(jié)果為陰性的現(xiàn)象,。
假陽性：因某些因素的影響導(dǎo)致陰性樣本檢測(cè)結(jié)果為陽性的現(xiàn)象。
3,、靈敏度：試劑盒方法能檢測(cè)到待測(cè)藥物的zui底濃度,。
4、準(zhǔn)確度：指測(cè)定值(平均值)與真值的接近程度,，表示分析結(jié)果的真實(shí)性,。通常用添加回收率來表示：
回收率=(測(cè)定值-空白值)/添加量 ×100％
5、精密度：指用某種方法重復(fù)測(cè)定同一均質(zhì)樣品測(cè)定值彼此接近程度,，表示分析結(jié)果的重復(fù)性,，常用變異系數(shù)表示。
6,、檢測(cè)限（LOD limit of detection）：檢測(cè)限指分析方法能夠從樣本的背景信號(hào)中檢測(cè)出待測(cè)物存在時(shí)所需的zui低濃度,。LOD反映了分析方法整體的靈敏度效能指標(biāo)。一般對(duì)分析方法在LOD水平的定量可信性（如精密度,、回收率）不作要求,，一般要求殘留分析方法LOD≦0.1MRL LOD=B+2SD或B+3SD
7、定量限（LOQ limit of quantitation）：指分析方法能夠?qū)悠分械拇郎y(cè)物進(jìn)行定量測(cè)定的zui低濃度,，用于定量方法的驗(yàn)證,。
8、殘留檢測(cè)限（ＭＲＬ）
規(guī)定允許食品中藥物zui高殘留量,，很多情況下各國規(guī)定的ＭＲＬ值之間有一定的差異,，多數(shù)情況下我國規(guī)定的ＭＲＬ值較日本、歐盟、美國的高一些,。
人抗硬皮病抗體70Elisa試劑盒基本配套儀器
1,、微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm
2、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b置
3,、均質(zhì)器
4,、振蕩器
5、渦旋儀
6,、離心機(jī)
7,、天平：感量0.01g
8、微量移液器：?jiǎn)蔚?20ml～200ml,、100ml～1000ml
多道 250ml
9,、超聲儀
10、恒溫培養(yǎng)箱/生化培養(yǎng)箱
11,、冰箱
12,、洗板機(jī)（可選）
13、磁力攪拌器
注意事項(xiàng)
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套,、穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗,。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解,。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈,。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮,。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用,。
【儲(chǔ)存及有效期】 于2～8℃避光保存,，有效期為12個(gè)月
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