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人血管緊張素Ⅱ受體2抗體Elisa試劑盒使用說明書
規(guī)格 96t
目 的：人血管緊張素Ⅱ受體2抗體Elisa試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)含量。檢測范圍：
1.5ng/L -40ng/L
實驗原理：
應用雙抗原夾心法測定標本中人丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)水平,。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM),， 再與 HRP 標記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)呈正相關(guān),。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度
（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)濃度,。
試劑盒組成：
Reagent Quantity
酶標包被板 12well×8strips
標準品:80 ng/L 1×0.5ml
標準品稀釋液 1×1.5ml
酶標試劑 1×6ml
樣品稀釋液 1×6ml
顯色劑 A 液 1×6ml
顯色劑 B 液 1×6ml
終止液 1×6ml
30 倍濃縮洗滌液 1×20ml×30flod
說明書 1
封板膜 2
密封袋 1
樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心。
2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合 10-20 分鐘后,， 離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,， 應該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） ,。仔細收集上清， 保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬/ml 左右,。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） ,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。
5.組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的 PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?nbsp; 2-8℃的溫度,。加入一定量的 PBS（PH7.4） ,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） ,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。
6.標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能 馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7.不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟：
1.標準品：其濃度為 80 ng/L(貯液)。先將其稀釋為 80 ng/L(標準曲線zui高濃度)后,，再準備
5 個稀釋標準品的 EP 管,，每個 EP 管中加入 150μL 的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成 80 ng/L, 40 ng/L,20 ng/L, 10 ng/L,5 ng/L, 2.5 ng/L,,，標準品稀釋液(0 ng/L)直接作為空白孔,。為保證實驗結(jié)果有效性,，每次實驗請使用新的標準品溶液
Tube 0 1 2 3 4 5
ng/L 80 ng/L 40 ng/L 20 ng/L 10 ng/L 5 ng/L 2.5 ng/L
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） ,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μ l，然后再加待測樣品 10 μ l（樣品zui終稀釋度為 5 倍） ,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁， 輕輕晃動混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,， 如此重復 5 次，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μ l,，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3,。
8.洗滌：操作同 5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μ l，再加入顯色劑 B50μ l,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色 15 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μ l，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） ,。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） ,。 測定應
在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。
注意事項：
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間 zui控制在 5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4.請每次測定的同時做標準曲線,，zui做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標準品孔*孔的 OD 值） ,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5.封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標， 在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.990 以上。
2.批內(nèi)與批見應分別小于 9%和 11%
3.保存條件及有效期：
a.試劑盒保存：2-8℃,。
b.有效期：6 個月
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