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詳細(xì)介紹
人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)Elisa試劑盒是一種用于特異性地超高靈敏地定量檢測大鼠血清,、血漿,、細(xì)胞或組織裂解液,、或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的胰島素的ELISA試劑盒。zui少5μl大鼠血清即可檢測,，5μl普通大鼠血清可以導(dǎo)致吸光度比本底增加約0.1(不同大鼠略有不同),，使用10μl大鼠血清檢測可以獲得非常理想的檢測數(shù)據(jù)。本試劑盒不僅適用于常規(guī)的大鼠血清胰島素水平檢測,，還特別適合于糖耐量實(shí)驗(yàn)(Glucose tolerance test, GTT)時(shí)測定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血清胰島素水平,。
人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)Elisa試劑盒檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好,。zui小檢出量為0.1ng/ml,，10μl 0.1ng/ml大鼠胰島素標(biāo)準(zhǔn)品可以導(dǎo)致吸光度比本底增加約0.07。與IGF-I,、IGF-II,、大鼠C肽、大鼠C肽均沒有交叉反應(yīng),，與豬胰島素,、綿羊胰島素、小鼠胰島素,、牛胰島素及人胰島素分別有628%,、256%、75%,、110%和195%交叉反應(yīng),。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。
Insulin即胰島素,，是由胰臟內(nèi)的胰島β細(xì)胞分泌產(chǎn)生的，分子量約5.8kDa,。胰島β細(xì)胞首先合成含有信號肽(24個(gè)氨基酸殘基)的前胰島素原(preproinsulin),，該信號肽將前胰島素原定位到粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。前胰島素原的信號肽被剪切后形成胰島素原(proinsulin),，并被釋放到粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi),，隨后在其中形成3個(gè)二硫鍵并正確折疊。隨后胰島素原進(jìn)入高爾基體,，經(jīng)蛋白水解酶的作用,，生成C肽(C-peptide)和由A鏈和B鏈通過兩個(gè)二硫鍵連接起來的胰島素。1923年和1958年,，胰島素的發(fā)現(xiàn)和其氨基酸序列測定都獲得了諾貝爾獎,。1965年，中國科學(xué)家實(shí)現(xiàn)人工全合成結(jié)晶牛胰島素,，也是生命科學(xué)*的重要成果,。胰島素的分泌主要受血糖水平的調(diào)控，血液中葡萄糖水平升高時(shí),，更多的葡萄糖通過GLUT2進(jìn)入β細(xì)胞,，并產(chǎn)生更多的ATP，ATP水平的升高導(dǎo)致ATP敏感的SUR1/Kir6.2鉀離子通道關(guān)閉,，使細(xì)胞內(nèi)鉀離子集聚,，從而引起細(xì)胞膜去極化，引發(fā)電壓門(voltage-gated)鈣離子通道打開，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高,，zui終導(dǎo)致胰島素的分泌,。胰島素的分泌分為兩個(gè)時(shí)段，*個(gè)時(shí)段通常受血糖調(diào)控,，持續(xù)時(shí)間約為10分鐘,；第二個(gè)時(shí)段是一個(gè)比較持續(xù)和緩慢的過程，通常分泌的高峰出現(xiàn)在*個(gè)時(shí)段后的2-3小時(shí),，并且不受血糖水平影響,。胰島素的分泌不僅受葡萄糖調(diào)控，也受乳糖,、核糖,、精氨酸和亮氨酸等氨基酸、副交感神經(jīng)釋放的乙酰膽堿,、腸道分泌的腸促胰島素(incretin)例如glucagon-like peptide-1 (GLP-1)和glucose-dependent insulinotropic peptide (GIP),、膽囊收縮素(cholecystokinin)、促胰島素分泌的磺脲(sulfonylruea)類藥物等的影響,。胰島素的釋放可被緊張時(shí)釋放的去甲腎上腺素(norepinephrine),、交感神經(jīng)釋放的兒茶酚胺(catecholamine)、以及胰高血糖素等所抑制,。
胰島素的主要生物學(xué)功能是降低血糖,，促進(jìn)合成代謝。胰島素可以促進(jìn)肝臟,、肌肉,、脂肪等器官和組織的葡萄糖攝入，抑制糖異生(gluconeogenesis),，促進(jìn)糖原合成等,。同時(shí)胰島素也可促進(jìn)脂質(zhì)合成和儲存，抑制脂質(zhì)分解,，促進(jìn)蛋白合成并抑制蛋白降解,，促進(jìn)DNA和RNA合成，抑制自噬(autophagy),。胰島素分泌不足或胰島素敏感性下降,，導(dǎo)致不能有效降低血糖，是糖尿病發(fā)生的主要原因,。胰島素分泌過量時(shí),，會導(dǎo)致低血糖,，甚至出現(xiàn)驚厥,、昏迷和休克。
人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2,。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上,，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合,。當(dāng)加入辣根過氧化物酶標(biāo)記靶蛋白抗體后,，辣根過氧化物酶標(biāo)記靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物,。zui后加入顯色劑TMB溶液,，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色,。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測,。靶蛋白濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，對照樣品吸光度值,，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
一個(gè)包裝的本試劑盒,，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測,，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
PI606-1 大鼠Insulin抗體預(yù)包被板 8孔×12條
PI606-2 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 10ml
PI606-3 大鼠Insulin標(biāo)準(zhǔn)品 2-4瓶
PI606-4 辣根過氧化物酶標(biāo)記大鼠Insulin抗體 10ml
PI606-5 洗滌液(20X) 30ml
PI606-6 TMB溶液 10ml
PI606-7 終止液 5ml
PI606-8 封板膜(透明) 2張
PI606-9 封板膜(白色) 2張
— 說明書 1份
保存條件：
除標(biāo)準(zhǔn)品外,，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效,。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效,，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效,。注意TMB溶液避光保存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉,，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn),，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶,，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶,，請室溫水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性,，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后,，如果有剩余請勿再次使用。
TMB對人體有刺激性,，請注意適當(dāng)防護(hù),。
如果發(fā)現(xiàn)TMB辣根過氧化物酶顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成藍(lán)色，應(yīng)該停止使用,。
加樣時(shí),，請注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭,，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差,。
不宜混用不同批號的試劑盒組份,，每批次試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要,，在加液后請輕輕晃動整個(gè)96孔板,，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行,，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃,。溫度低于25℃會導(dǎo)致zui終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要,，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大,。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度,。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生,。
人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)Elisa試劑盒僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品,，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
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