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人凋亡信號調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)Elisa試劑盒基本組成
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；
（2）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物）,；
（3）酶的底物,；
（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）,；
（5）結(jié)合物及樣本的稀釋液,；
（6）洗滌液；
（7）酶反應(yīng)終止液,。
4.1 免疫吸附劑
已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的條件下一般可保存6個月,。有些不完整的試盒，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體,，檢測人員需自行包被,。以下簡述固相載體和包被過程。
4.1.1 固相載體
人凋亡信號調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)Elisa試劑盒固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器,，不參與化學反應(yīng),。可作ELISA中載體的材料很多,，zui常用的是聚苯乙烯,。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性,，加之它的價格低廉,，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,，可制成各種形式,。
ELISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管,。以微量滴定板zui為常用,，于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板，上標準的微量滴定板為8×12的96孔式,。為便于作少量標本的檢測,，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的，放入座架后,，大小與標準ELISA板相同,。ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測,，并可在特制的比色計上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測,，包括加樣,、洗滌、保溫,、比色等步驟,，對操作的標準化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,，其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加,，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測抗體時空白值較大,。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高,，各板之間,、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,，因此，每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能,。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯,。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯的特點為質(zhì)軟板薄,，可剪割,、價廉，但光潔度不如聚苯乙烯板,，孔底亦不如聚苯乙烯平整,。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高,。
為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣,，可應(yīng)用如下的試驗：用其他免疫學測定方法選出一個典型的陽性標本和陰性標本，將它們進行一系列稀釋后,，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進行測定,，然后比較結(jié)果。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大這種載體就是這一ELISA測定項目的zui合適的固相載體,。
人凋亡信號調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)Elisa試劑盒在ELISA中,，用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加,。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2,，小珠均為1000mm2,，將近ELISA板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加,。再者,，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點的暴露面處于*反應(yīng)狀態(tài)，因此珠式ELISA的反應(yīng)往往更為靈敏,。小珠的另一特點是更易于使洗滌*,，使用特殊的洗滌器，使小珠在洗滌過程中滾動淋洗,，其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為好,。但由于磨砂工藝的難度較大，小珠的均一性較差,。
小試管作為固相載體也有較大的吸附表面，而且標本的反應(yīng)量也相應(yīng)增加,。板式及珠式ELISA的標本量一般為100-200ul,，而小試管可根據(jù)需要加大反應(yīng)體積，標本反應(yīng)量的增加有助于試驗敏感性的提高,。小試管還可以當作比色杯,，zui后直接放入分光光度計中比色。
也有應(yīng)用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為ELISA固相載體的,。其優(yōu)點是表面積極大,，反應(yīng)在懸液中進行，其速率與液相反應(yīng)近似,。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,，反應(yīng)后用磁鐵的吸引進行分離，洗滌方便,，人凋亡信號調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)Elisa試劑盒一般均配以特殊儀器,。
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