人γ肽（Pγ）Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測樣品中靶蛋白的的濃度,，其原理見圖2,。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時,，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合,。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合,，形成夾心的免疫復(fù)合物

【原理】

人γ肽(Pγ)Elisa試劑盒采用免疫膠體金層析技術(shù)制成,，可快速檢測豬血清中的豬瘟病毒抗體。將豬瘟病毒抗原包被在硝酸纖維素膜的檢測線（T）上,，抗豬瘟病毒抗體包被在硝酸纖維素膜的質(zhì)控線（C）上,，用膠體金標(biāo)記的豬瘟病毒抗原干燥后置于玻璃纖維素膜下端。當(dāng)血清加入加樣孔內(nèi),，由于層析的原理,，血清開始沿紙條移動，當(dāng)遇上干燥的金標(biāo)抗原,，將其溶解,，并帶著金標(biāo)抗原繼續(xù)往上移動,，至硝酸纖維素膜的檢測線。如果樣品中有豬瘟病毒抗體存在時,，包被在檢測線上的豬瘟病毒抗原和金標(biāo)豬瘟病毒抗原與樣品中的豬瘟病毒抗體將會在檢測線上形成一個夾心的免疫復(fù)合物,，呈一條紫紅色線，判定為陽性,。樣品中的抗體效價越高,，色線顏色越深。如果樣品中沒有豬瘟病毒抗體,，檢測線（T）上沒有色帶出現(xiàn),，判定為陰性。樣品和金標(biāo)抗原繼續(xù)往上移至質(zhì)控線時,，此處的抗豬瘟病毒抗體將會同金標(biāo)豬瘟病毒抗原結(jié)合,，在質(zhì)控線（C）上形成一條紫紅色線，證明本檢測試劑有效,。

【血清制備】

    按常規(guī)方法抽取2-3ml血液置潔凈干燥的試管中,，靜置0.5-1小時待血液凝固后于4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘（也可將血液靜置1-2小時，待血液凝固自然析出血清）,，分離血清,。要求血清清亮，無溶血,、無污染,。血清樣品短期可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存,。

【人γ肽(Pγ)Elisa試劑盒操作方法】

1.在檢測卡的加樣孔內(nèi)加入２滴（約80ul）待檢血清樣品,。

2. 將檢測卡平放于桌面上，在室溫下靜置5-20分鐘內(nèi)判定結(jié)果,，超過20分鐘的結(jié)果只能作為參考,。

【結(jié)果判斷】

 

1.   陰性：在觀察孔內(nèi)，只有對照線區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色線,。

2.   陽性：在觀察孔內(nèi),，檢測線區(qū)（T）及對照線區(qū)（C）同時出現(xiàn)紫紅色線?？贵w滴度越高,，檢測線（T）顏色越深。

3.   弱陽性：在觀察孔內(nèi),，檢測線區(qū)（T）及對照線區(qū)（C）同時出現(xiàn)紫紅色線,，但檢測線區(qū)（T）出現(xiàn)的顏色很淺。

4.   失效：在觀察孔內(nèi),，對照線區(qū)（C）和檢測線區(qū)（T）都不出現(xiàn)色線,；或僅檢測線區(qū)(T)出現(xiàn)色線,。

【診斷參考】

1．如果該豬未接種過豬瘟病毒疫苗：

a) 當(dāng)被檢樣品檢測線（T）處無明顯色帶出現(xiàn)，說明被檢測樣品中沒有豬瘟病毒抗體,。如果豬群健康,，應(yīng)當(dāng)及時進(jìn)行豬瘟病毒疫苗接種。

b) 當(dāng)被檢樣品檢測線（T）處有明顯色帶出現(xiàn),，則該豬有可能為野毒感染,，應(yīng)進(jìn)一步觀察驗證,。

2．如果該豬已接種過豬瘟病毒疫苗：

c) 當(dāng)被檢樣品檢測線（T）條帶的色澤≥對照卡中1：16效價時,，說明豬瘟病毒抗體的滴度較高，已達(dá)到抵御強(qiáng)度攻擊的保護(hù)水平,。

b) 當(dāng)被檢樣品檢測線（T）條帶的色澤＜對照卡中1：16效價時,，說明豬瘟病毒抗體效價未達(dá)到抵御豬瘟病毒強(qiáng)度攻擊的zui低保護(hù)滴度，建議進(jìn)行疫苗補(bǔ)種,。

【人γ肽(Pγ)Elisa試劑盒注意事項】

1.檢測前請仔細(xì)閱讀說明書,，本產(chǎn)品提供的各種試劑僅供本實驗用；

2.檢測卡從冰箱中取出時應(yīng)恢復(fù)到室溫后打開,，打開的檢測卡應(yīng)盡快使用以免受潮后檢測卡將失效,；

3.待檢血清樣品應(yīng)新鮮清亮，溶血或腐的樣品不可用于檢測,；

4.實驗的廢棄物應(yīng)按污染物處理規(guī)定妥善處理,。

【儲存及有效期】人γ肽(Pγ)Elisa試劑盒保存于干燥陰涼處（2-30℃），保質(zhì)期24個月,。