人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測樣品中靶蛋白的的濃度,，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上,，當加入標準品或樣品時,，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗靶蛋白抗體后,，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合,，形成夾心的免疫復(fù)合物

【產(chǎn)品名稱】

通用名：人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽Elisa試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

【包裝規(guī)格】 96T/盒

【預(yù)期用途】 禽流感（Avian influenza，AI）是目前危害國內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)的一種急性接觸性病毒性傳染病,。疫苗免疫是預(yù)防和控制禽流感發(fā)生的zui有效途徑,，而免疫后抗體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力,。

   人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽Elisa試劑盒適用于不同品種,、不同日齡雞的血清中禽流感病毒特異性抗體的檢測?？捎糜谇萘鞲校ㄈ《荆┮呙缑庖咝Чu價,、免疫時間的確定分析、地區(qū)雞群禽流感免疫狀況評價等,。

【原    理】

本試劑盒系由預(yù)包被禽流感病毒（AIV）重組抗原的微孔板和酶標記二抗及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中禽流感病毒特異性抗體,。實驗時，在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,，經(jīng)溫育后,，若樣品中含有禽流感病毒的特異性抗體，則將與包被板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后,；再加入酶標二抗，與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液,，與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性抗體,。

【儲存及有效期】

于2～8℃避光保存,，有效期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存,，使用期限為1個月,。

【試劑盒組成】

1.

禽流感病毒抗原預(yù)包被微孔板條

96T×1

2.

酶標記物  (紅蓋)

11ml×1

3.

樣品稀釋液  (黃蓋)

50ml×1

4.

20X濃縮洗滌液  (透明蓋)

40ml×1

5.

底物液A  (白蓋)

7ml×1

6.

底物液B  (黑蓋)

7ml×1

7.

終止液  (黃蓋)

7ml×1

8.

陽性對照 (紅蓋，已滅活)

0.5 ml×1

9.

陰性對照 (綠蓋,，已滅活)

0.5 ml×1

10.

蓋板膜

1張

11.

自封袋

1個

12.

說明書

1份

【樣品制備】  取動物全血,，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無溶血,、無污染。樣品短期可于2～8℃保存,，長期需置-20℃保存,。

【樣品稀釋】  用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如5μl血清加入495μl樣品稀釋液中，混勻）,。陰,、陽性對照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右）,，并搖動使沉淀的鹽溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【試驗操作方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量微孔板條,，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl,；陰性/陽性對照孔分別加入陰性/陽性對照血清100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣品100μl。

4.混勻,，置37℃反應(yīng)30分鐘,。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次，拍干,。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌,，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl,，混勻,，用空白孔調(diào)零，于450nm(630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A450）,。

【結(jié)果判定】

1.陰性對照：正常情況下,，陰性對照孔A值≤0.10；

2.陽性對照：正常情況下,，陽性對照孔A值≥0.6,；

3.臨界值（C.O）的計算：C.O=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算）；

4.結(jié)果判定：樣品A值≥C.O為陽性,；樣品A值＜C.O為陰性,。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中禽流感病毒IgG抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強,、中,、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套,、穿工作衣,，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以*溶解,。

5.洗滌時各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮,。

7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。

8.不同批號試劑組分不得混用。