人心鈉肽（ANP）Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測(cè)樣品中靶蛋白的的濃度,，其原理見圖2,。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí),，其中的靶蛋白會(huì)與捕獲抗體結(jié)合,。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合,，形成夾心的免疫復(fù)合物

【產(chǎn)品名稱】

通用名：人心鈉肽(ANP)Elisa試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒,、96T×2/盒

【原    理】

    人心鈉肽(ANP)Elisa試劑盒系由預(yù)包被豬細(xì)小病毒抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)豬血清,、血漿樣本中豬細(xì)小病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬細(xì)小病毒抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液,，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有豬細(xì)小病毒抗體,。

【試劑盒組成】

序號(hào)

名稱

規(guī)格（96T×1）

規(guī)格（96T×2）

1.

酶標(biāo)板

96T×1

96T×2

2.

酶標(biāo)記物  (紅蓋)

11ml×1

11ml×2

3.

樣品稀釋液 (黃蓋)

50ml×1

50ml×1

4.

20X濃縮洗滌液

40ml×1

40ml×1

5.

底物液A  (白蓋)

6ml×1

11ml×1

6.

底物液B  (黑蓋)

6ml×1

11ml×1

7.

終止液  (黃蓋)

6ml×1

11ml×1

8.

陽性對(duì)照  (紅蓋)

1.0 ml×1

1.5 ml×1

9.

陰性對(duì)照  (綠蓋)

1.0 ml×1

1.5 ml×1

10.

蓋板膜

1張

2張

11.

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

12.

說明書

1份

1份

   

 

 

 

 

 

 

 

 

【儲(chǔ)存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月,。

包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存,，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm,、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器,。

【人心鈉肽(ANP)Elisa試劑盒樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮，無溶血,、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，長(zhǎng)期需置-20℃保存,。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）,。陰,、陽性對(duì)照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。

3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl,；陰,、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘,。

5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘,。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

9.每孔加終止液50μl,，混勻，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）,。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照≤0.10,，陽性對(duì)照≥0.6,。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1.樣品A值≥0.38為陽性；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑,；樣品A值＜0.2為陰性,。

2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性或可疑時(shí)表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗,。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)豬血清,、血漿中豬細(xì)小病毒抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng),、中,、弱的粗略評(píng)估。

【人心鈉肽(ANP)Elisa試劑盒注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套,、穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗,。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解,。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈,。

6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮,。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用,。