TdT加尾法DNA生物素標(biāo)記試劑盒（B）是基于 TdT 末端轉(zhuǎn)移酶能夠在 DNA 的 3’端添加 dNTP 尾巴的原理而設(shè)計(jì),，該反應(yīng)的示意圖如下：

TdT加尾法DNA生物素標(biāo)記試劑盒（B）是在上述原理的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的,，具有下列特點(diǎn)：
1. 快速，15 分鐘即可完成標(biāo)記反應(yīng),。
2. 不但可用于單鏈 DNA 和 DNA Oligo 標(biāo)記,，還可用于 3’突出的雙鏈
DNA 標(biāo)記，但后者標(biāo)記效率稍低,。
3. 可用同位素底物和非同位素底物（生物素和標(biāo)記的核苷酸等）,。
4. 提供不帶標(biāo)記核苷酸、帶生物素標(biāo)記核苷酸和帶標(biāo)記核苷酸三種
選擇,。
5. 同時(shí)提供非標(biāo)記的 dATP,，用戶可以用其調(diào)節(jié)加尾長(zhǎng)短和標(biāo)記核苷酸摻
入比例。
6. 標(biāo)記的探針可用于電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA）,、原位雜交（ISH）,、Northern
Blot（不推薦用于低豐度 RNA 檢測(cè)）,、小 RNA Northern、Southern Blot
（不推薦用于單拷貝基因檢測(cè)）,、菌落雜交,、斑點(diǎn)印跡雜交分析等。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 5 次包裝
TdT 緩沖液,，5× 20 uL
TdT（末端轉(zhuǎn)移酶,，10 U/uL） 10 uL
dATP，2 mM 5 uL
標(biāo)記核苷酸 （A,、B,、C 不同，見(jiàn)注）
超純水 100935 1 mL
使用手冊(cè)
90605s
c
1 份
注：A 型用于自選標(biāo)記,，用戶需自備標(biāo)記
核苷酸,，本產(chǎn)品不提供標(biāo)記核苷酸；B 型
提供 5 uL Biotin-11-dUTP,；C 型提供含
5 uL DIG-11-dUTP,。

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存,，有效期一年
自備試劑 DNA 模板
使用方法 1. 在 0.2 mL 微量離心管中按下表設(shè)置一個(gè) 20 uL 體系的標(biāo)記反應(yīng)（如果
需要標(biāo)記更多探針,，請(qǐng)?jiān)黾訕?biāo)記體積而不要增加探針 DNA 的濃度）：
成份 用量
探針 DNA 100-200 pmol
TdT Buffer，5× 4 uL
標(biāo)記核苷酸,，1 mM
（A 型需自備標(biāo)記核苷酸） 1 uL
dATP,，2 mM （見(jiàn)下注）
TdT 末端轉(zhuǎn)移酶（10 U/uL） 2 uL
超純水 補(bǔ)到 20 uL
注: dATP 可以不加，但這樣得到的加尾全部是標(biāo)記核
苷酸,，由于空間阻礙,，靈敏度不一定*。如果雜交
效果不好,，摻入一定比例的 dATP 到標(biāo)記核苷酸中,，
以控制標(biāo)記的密度，提高比活,。具體比例如何可以自
己優(yōu)化,。
2. 37℃反應(yīng) 15 分鐘，延長(zhǎng)到 30 分鐘也可以,。如果沒(méi)有非標(biāo)記核苷酸存在,，
一般可以加尾 3-5 個(gè) Biotin 或 DIG 標(biāo)記的核苷酸（標(biāo)記物空間阻礙抑制
延長(zhǎng)）；如果有在加尾反應(yīng)中加入一定比例的非標(biāo)記核苷酸 dATP（其他
dNTP 也可,，只是本試劑盒只提供 dATP 而已）,，每條探針上可加上約 100
個(gè)核苷酸，平均含 5 個(gè)標(biāo)記核苷酸
3. 70℃ 10 分鐘滅活 TdT 酶,。
4. 如果需要,，可以 PAGE 電泳+銀染（相關(guān)試劑需要另購(gòu)）檢測(cè)標(biāo)記效率，
帶標(biāo)記的探針泳動(dòng)速度將低于沒(méi)標(biāo)記的探針,。
5. 如果是非同位素標(biāo)記,，探針不需純化可以直接用于雜交。如果需要純化非
同位素標(biāo)記的探針,，請(qǐng)不要酚/氯抽提,，因?yàn)榉峭凰貥?biāo)記物一般會(huì)使
探針 DNA 進(jìn)入有機(jī)相而丟失。
6. 使用時(shí)需將探針以 1-8 ng/uL 的終濃度加入到雜交液中（如果探針是雙
鏈 DNA,，加入前還需熱變性）,。如果不立即使用，非同位素標(biāo)記的探針
DNA 可-20℃長(zhǎng)期放置一年,，同位素標(biāo)記的探針 DNA 不能放置,。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 隨機(jī)引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒（CAT#:90603）
PCR 法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒（CAT#:90604）

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