SuperTOPO-Kan平末端克隆試劑盒是基于 Topoisomerase 能夠在幾秒鐘之內高速連接 DNA 片段的
原理開發(fā)的無背景克隆試劑盒,，它使用了本公司通過定點突變改良的 TOPO酶，連接效率比野生型更高,。

SuperTOPO-Kan平末端克隆試劑盒具有下列特點：
1. 高效快速,，連接反應幾乎在幾秒鐘內完成,，連接率幾乎達到 100%。
2. 適用于具有 A 尾巴的 DNA 片段使用,。
3. 無雜帶或引物二聚體的 PCR 擴增產物可以不經過純化直接用于連接反應,。
4. 轉化時只需要 37℃10 分鐘復蘇即可涂盤，免去冰浴,、熱休克和復蘇步驟,。
5. 零背景，無需 IPTG-X-Gal 藍白斑篩選,，故不需要 IPTG-X-Gal 培養(yǎng)基,。
6. 本試劑盒按 10 uL 標準反應體系，有 25 次和 50 次兩種規(guī)格包裝供選擇,。
7. 提供含 Amp 和 Kan 兩種抗性的載體供選擇（160686-25A/50A 是含
Amp 抗性 TOPO 載體,，160686-25K/50K 是含 Kan 抗性 TOPO 載體）。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 25 次熱封袋
包裝
50 次熱封袋
包裝
SuperTOPO-Amp 載體 160686-A 25 uL（其一） 50 uL（其一）
SuperTOPO-Kan 載體 160686-K 25 uL（其一） 50 uL（其一）
連接緩沖液 160686B 25 uL 50 uL
超純水 100935 1 mL 1 mL
使用手冊 1 份
注意：160686-25A/50A 提供 SuperTOPO-Amp 載體,，160686-25K/50K
提供 SuperTOPO-Kan 載體,。
運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存,，有效期一年,。
自備試劑 DNA 插入片段、感受態(tài)細胞,、SOC 或 LB 培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿（含抗菌素和不含
的）
使用方法 1. PCR 擴增或酶切回收 DNA 插入片段,。如果是 PCR 制備插入片段，所用
引物不能磷酸化,，使用 Taq 系列的 DNA 聚合酶,。
2. 電泳檢測并相對定量 PCR 片段或酶切回收片段（跟 DNA marker 比較）。
并根據(jù)插入片段長度和下表確定每次連接反應需要的*用量：
插入片段長度 *用量
100-1000 bp 20-50 ng
1000-2000 bp 50-100 ng
2000-5000 bp 100-200 ng
3. 在一個干凈的塑料離心管中,，室溫下（不要放在冰上）設置如下連接反應
體系：
成 份 用 量
純化后的 PCR 產物 不超過 8 uL（詳見注意事項）
SuperTOPO-Amp 載體或
SuperTOPO-Kan 載體
1 uL
連接緩沖液 1 uL
超純水 補到 10uL
注意：如果使用未經純化的 PCR 產物,，則需要加入量不能超過 1 uL，否
則 PCR 體系會干擾連接體系,。
4. 輕柔吹打混勻后,，短暫離心，常溫（20-30℃）放置 0-5 分鐘,。如果在冬
天室溫低于 20℃,，建議使用 25℃水浴或金屬浴。注意：連接時間超過 5
分鐘的話連接效率會降低,。
5. 如果當天不轉化,，可以將離心管放-20℃保存。如果轉化,，則取 5 uL 連
接液加到 50-100 uL 剛剛融化的感受態(tài)細胞中,，輕柔混勻,。注意：本產
品要求感受態(tài)細胞的轉化效率不得低于 5﹡10E7cfu/ug。
6. 如果片段長度小于 2 Kb,，則不需要冰浴和熱激，直接在離心管中加入 500
uL 不含抗菌素的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基,，然后取 200 uL 涂盤,。也可以先
3000g 離心 2 分鐘后，棄掉大部分上清,，只留約 100 uL 左右,，然后重
懸細菌后全部涂盤在含 Amp（對 SuperTOPO-Amp）或 Kan（對
SuperTOPO-Kan）的培養(yǎng)皿上，37℃過夜培養(yǎng),。
7. 如果片段長度長于 2 Kb,，則按常規(guī)轉化方式，先冰浴 2-30 分鐘,，然后
42℃熱激 30 秒,，冰上防放置 2 分鐘，再在離心管中加入 500 uL 不含
抗菌素的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基,，37℃ 250 rpm 培養(yǎng) 60 分鐘,，然后取 200
uL 涂盤。也可以先 3000g 離心 2 分鐘后,，棄掉大部分上清,，只留約 100
uL 左右，然后重懸細菌后全部涂盤在含 Amp（對 SuperTOPO-Amp）
或 Kan（對 SuperTOPO-Kan）的培養(yǎng)皿上,，37℃過夜培養(yǎng),。
8. 用菌落 PCR、直接測序或其他方法鑒定重組子,。
關聯(lián)產品 SuperTOPO 通用克隆試劑盒,、SuperTOPO Blunt 克隆試劑盒