花生源性成分熒光PCR檢測試劑盒花生是常見的農(nóng)作物，很多時候需要通過檢測花生專一性內(nèi)源基因的存在 來判斷某些食品中是否含有花生成分或添加劑,。本產(chǎn)品即是基于基因熒光探針 PCR 法的花生 Arah1 基因的快速檢測試劑盒,，適用于樣品中花生源性成分的 快速檢測

花生源性成分熒光PCR檢測試劑盒具有下列特點：

1. 靈敏度高，分析靈敏度可以達(dá)到 50 拷貝/uL,，遠(yuǎn)高于常規(guī)方法,，也比常規(guī) 的 PCR 檢測高 100 倍。

2. 特異性高,，根據(jù)花生 Arah1 基因的保守區(qū)設(shè)計引物,，不會誤檢。

3. 一管封閉式,，避免了 PCR 產(chǎn)物對后續(xù) PCR 的污染,。

4. 線性范圍廣，在 10-107拷貝/uL 的靶分子濃度范圍內(nèi)均呈線性,。

5. 簡單快捷,，只需要 2 小時即可得到實驗結(jié)果。 

規(guī)格及成分 成 份 編 號 十孔盒包裝
即用型 qPCR Mix 90408 750 uL
Arah1 專一性引物對（25uM each） Yw14321433 100 uL
Arah1 陽性對照片段（10E10 拷貝/uL） Yw14341435 10 uL
Arah1 探針（5.4nM,，5FAM-3HBQ1） T11-180403 25 uL（棕色）
超純水 100935 1 mL
使用手冊 1 份 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,、-20℃保存，有效期一年,。
自備試劑 樣品,。
使用方法 一、樣品 DNA 的制備
用自選方法純化需要檢測樣品的 DNA,，也可以另購本公司的無酚無氯柱
式植物 DNAout 或柱式植物 DNAout,，上述兩款產(chǎn)品跟本試劑盒兼容。
二,、制備 Arah1 陽性片段的不同稀釋樣品（以制備 10-10E6 這 6 個 10 倍稀
釋度為例,。先將對照從 10E10 稀釋到 10E7 拷貝/uL。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常
高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑
盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,，分別為 1,2,3,4,5 和 6 號,。
2. 用帶芯分別加入 45 uL 超純水（zui用帶芯槍頭，下同）,。
3. 在 6 號管中加入 5 uL 濃度為 10E7 的 Arah1 陽性片段,，充分震蕩 1 分鐘。
4. 換槍頭，從 6 號管中取 5 uL 溶液到 5 號管中,，充分震蕩 1 分鐘。
5. 換槍頭,，從 5 號管中取 5 uL 溶液到 4 號管中,，重復(fù)上面的操作直到得到 6
個稀釋度的樣品。1-6 號管中陽性對照片段的濃度分別為 10E1 到 10E6
拷貝/uL,。
6. 從 6 個管中分別取 5 uL 進(jìn)行定量 PCR（見下步）,，每個樣品zui重復(fù) 3
次。
三,、熒光定量 PCR 反應(yīng)（30 uL 體系）
在 PCR 管中加入下列成分（每個樣品zui重復(fù)三次,，這里只列出一次）：
成 份 樣品
6 個陽性對照
稀釋梯度
陰性對照
Arah1 專一性引物對 2 uL 2 uL 2 uL
Arah1 專一性探針 0.5uL 0.5uL 0.5uL
樣品 DNA（自備） 5 uL 無 無
Arah1 陽性對照 無
5 uL（每個管加一
個稀釋度的對照） 無
補(bǔ)超純水到 15 uL 15 uL 15 uL
即用型熒光 PCR Mix 15 uL 15 uL 15 uL
輕柔混勻后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行定量 PCR,，反應(yīng)參數(shù)如下：
過程 溫度 時間 其他
預(yù)變性 95℃ 5 分鐘
PCR 反應(yīng)
（40 個循環(huán)）
95℃ 30 s
52℃ 30 s
72℃ 30 s 采集數(shù)據(jù)
注意：儀器將檢測擴(kuò)增產(chǎn)物與探針雜交所產(chǎn)生的熒光信號,，獲取數(shù)據(jù)。

熒光通道選擇：檢測通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，請勿選擇 ROX 參比熒光。
四,、數(shù)據(jù)處理
以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,，以 Ct 值為縱軸，通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度,。,。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 大豆源性成分熒光 PCR 檢測試劑盒（CAT#:11-180402）。