即用型熒光定量RT-PCR試劑盒是基于熒光染料檢測的即用型雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒,，可以對靶片段進(jìn)行實時定量 RT-PCR 分析（quantitative RT-PCR,、qRT-PCR）。

即用型熒光定量RT-PCR試劑盒產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的
緩沖液組分,、MMLV-Taq DNA 聚合酶混合物,、dNTPs、MgCl2 及新型熒光染料
DNAgreen 等所有一管式實時定量 RT-PCR 所需要的成分,，用戶只需加入 RNA 模板和
引物即可進(jìn)行實時定量 RT-PCR 反應(yīng),，

具有廣泛的用途。
1. 一管式完成 qRT-PCR 反應(yīng),，避免樣品交叉污染,，尤其適合臨床應(yīng)用。
2. 即開即用,，用戶不需要單獨準(zhǔn)備 qRT-PCR 所需的各種試劑,。
3. 主要成分只有兩個（RT-PCR buffer 和 MMLV-Taq Mix），將加樣步驟減少到zui低,，
極大降低了加樣誤差,，增加了可重復(fù)性。
4. 使用范圍廣,，適用于從病毒 RNA 到人 RNA 的各種 RNA 模板,。
5. 高靈敏度，每個 RT-PCR 體系zui低可以檢測 200 拷貝的 RNA 分子,，可擴(kuò)增的模版
RNA 的zui長達(dá) 2000 nt,。
規(guī)格及成分 成 份 編 號
50 次
塑料袋包裝
300 次
塑料袋包裝
雙酶一管式 qRT-PCR Buffer，2× 750 uL 4.5 mL
MMLV-Taq Mix 100 uL 600 uL
RNase-free 水 80403 1 mL 6 mL
使用手冊 101219sc 1 份 1 份

運輸及保存 低溫運輸,，-20℃保存, 保存期限為一年,。
自備試劑 RNA 模板、引物,。有的機(jī)型需要自備 ROX,。
使用方法
1. 在一干凈的無 RNase 的 PCR 管中，先加入下列成分（下面只列出樣品管的設(shè)置情
況,，用戶可自己根據(jù)需要設(shè)置陽性和陰性對照）：
成分 樣品
自備 RNA 模板（分下面三種情況） 見下
總 RNA 100-500 ng
或 poly(A) mRNA 10-500 ng
或體外轉(zhuǎn)錄得到的專一 RNA 0.01 pg-500ng
RNA 特異性引物一（自備） 終濃度 300nM（注 1）
RNA 特異性引物二（自備） 終濃度 300nM
RNase-free 水 補(bǔ)到 10 uL
雙酶一管式 qRT-PCR Buffer（2×） 15 uL
自備 ROX（某些熒光 PCR 機(jī)型需要） 3 uL（注 2）
MMLV-Taq Mix 2 uL
注 1：通常初次使用本試劑時,，可用引物濃度 300nM 進(jìn)行實驗，根據(jù)實驗結(jié)果具體
情況，在 200～800nM 范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度,。引物,、待檢樣品的具體加量用戶可以
根據(jù)實際情況調(diào)整，同時增減 RNase-free 水用量,，保證總反應(yīng)體積不變即可,。
注 2：如果使用 ABI 公司的 7500，7700 和 7900 三種型號的熒光 PCR 儀器,，則
需用自備的 ROX 進(jìn)行 Ct 值校正,。對 ABI 7700 和 7900，ROX 的*濃度為 1×
（即在每 30 uL 反應(yīng)體系中加 3 uL 10×ROX）,。對 ABI 7500,， ROX 的*濃
度為 0.05-0.1×（每 30 uL 反應(yīng)體系加 0.3 uL 10×ROX；也可將 10×ROX 稀
釋到 1×,，然后每個反應(yīng)體系加入 3 uL 1×ROX）,。ROX 會在溶解曲線中產(chǎn)生噪音，
因此,，如果出現(xiàn)了雜峰,，將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項
取消打勾，然后重新分析數(shù)據(jù),。對于 iCycler IQ, MJ Opticon, MJ Chromo4,
MX3000, MX4000, RotorGene3000, RotorGene 6000 和 LightCycler 480 等
型號的熒光 PCR 儀器,，ROX 不是必須的，但加入的話也不會影響整個 PCR 分析,。
2. 輕柔混合均勻后放入 PCR 儀中進(jìn)行熒光定量 RT-PCR,。
3. 設(shè)定 RT-PCR 反應(yīng)條件時，一般將 RT 的條件設(shè)定成 42℃ 30 分鐘,，后接 94℃變
性 5 分鐘,，然后進(jìn)入 PCR 循環(huán)（PCR 參數(shù)將根據(jù)自備引物的 Tm 值和 PCR 產(chǎn)物
長度由用戶自行決定注）、zui后 72℃ 5 分鐘,。并在退火或延長步驟中記錄熒光信號,。
本產(chǎn)品中所含的熒光染料在沒結(jié)合 DNA 時，zui大吸收光譜在 471nm,，結(jié)合 DNA
時的zui大吸收光譜在 500nm,，zui大發(fā)射光譜在 530nm。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 即用型熒光定量 PCR 試劑盒,、PCR 級綠如藍(lán)染料,。