酵母化學(xué)感受態(tài)細胞制備試劑盒本酵母化學(xué)感受態(tài)細胞制備試劑是一種通過化學(xué)處理,，高效快速制備釀酒酵母化學(xué)感受態(tài)細胞，用于長期凍存以備后續(xù)轉(zhuǎn)化的產(chǎn)品,，

酵母化學(xué)感受態(tài)細胞制備試劑盒具有下列特點：
1. 一次制備,，-80℃保存，多次使用,，免去每次轉(zhuǎn)化都要制備釀酒酵母感受態(tài)
細胞,。
2. 操作簡單，單溶液制備,，除酵母培養(yǎng)的時間外,，整個操作只需要 30 分鐘
3. 主要用于釀酒酵母 S. cerevisiae，也適用于其他多種實驗用酵母菌株,，包括
S. pombe,、C. albicans、Pichia pastoris 等,。
4. 受體酵母可以不含質(zhì)粒,，也可用于攜帶有選擇性質(zhì)粒的酵母（如雙雜交體系
中的酵母）。
5. 對釀酒酵母,，zui高轉(zhuǎn)化效率可達到 0.2-1×10
5個轉(zhuǎn)化子/ug 質(zhì)粒 DNA。對
其他酵母,，效率稍低,，范圍在 100-2000 個轉(zhuǎn)化子/ug 質(zhì)粒 DNA。
6. 得到的感受態(tài)細胞可以用各種線性或環(huán)狀酵母穿梭質(zhì)粒 DNA 進行轉(zhuǎn)化,，例
如 YIp, YRp, YCp, YEp 和 YAC 等,。
7. 可以用于酵母雙雜交、定點突變（Site－Directed Mutagenesis）,、基因破
壞（Gene Disruption）,、等位突變基因修復(fù)（Mutant Allele Recovery）
等實驗。
8. 本產(chǎn)品可以制備 20 只酵母感受態(tài)細胞（需要 200mL 酵母培養(yǎng)液），并還帶
高效轉(zhuǎn)化液,。 規(guī)格及成分 成 份 編 號 小紙盒包裝
制備液 A 81109A 120 mL
制備液 B 81109B 6 mL
制備液 C 81109C 10 mL
轉(zhuǎn)化液 A 81109D 30 mL
轉(zhuǎn)化液 B 81109E 30 mL
使用手冊 81109sc 1 份
自備試劑 YPD 培養(yǎng)基
運輸及保存 常溫運輸和保存,，有效期一年。

使用方法 一：酵母化學(xué)感受態(tài)細胞的制備
說明：按本方法制備 1 管酵母化學(xué)感受態(tài)細胞就需要 OD600 達到 0.6-1.0 的新
鮮酵母培養(yǎng)液 10 mL,，用戶需根據(jù)所需酵母感受態(tài)細胞的數(shù)量決定培養(yǎng)細胞的體
積,。如果超過 10 mL，則制備液的使用量需要按比例增加,。
1. 挑取酵母受體菌的新鮮的單菌落（4℃放置不超過 3 周的也可以）,，接種
到裝在 50mL 離心管中的 10 mL 的自備的 YPD 培養(yǎng)基中。
2. 30℃搖晃培養(yǎng),，搖床速度 250 rpm/分鐘,，直到 OD600 達到 0.6-1.0
（相當(dāng)于 0.6-1×10
7細胞/mL）。
3. 室溫 3000rpm 離心 5 min,，棄上清得酵母細胞沉淀,。
4. 新鮮制備適量的酵母感受態(tài)制備工作液。對 10 mL 酵母需要 5.25 mL
的工作液,，其配制方法是：將 4.75 mL 制備液 A,、0.25 mL 制備液 B
和0.25 mL制備液C加入到一個無菌的離心管中后充分震蕩混勻即可。
酵母感受態(tài)制備工作液可放室溫待用,。
5. 用 0.5 倍體積的新鮮配制的酵母感受態(tài)制備工作液洗滌酵母細胞沉淀
一次（對 10 mL 酵母則需要 5 mL 酵母感受態(tài)制備工作液）,。即混合后
振蕩 1 分鐘，室溫 3000rpm 離心 3 分鐘,，去上清得洗滌后的酵母細胞
沉淀,。
6. 再用 0.02 倍體積的酵母感受態(tài)制備工作液充分重懸菌體（對 10 mL
酵母，則需要 0.2 mL 酵母感受態(tài)制備工作液）,。
7. 按每管 0.2 mL 分裝到冷凍管中,，放入保溫冰盒中冷卻半小時后再放入
-80℃冰箱待用。0.2 mL 的感受態(tài)細胞足夠 1 次轉(zhuǎn)化使用,。注意：放
入保溫冰盒的目的是使溫度緩慢下降,，急凍將使轉(zhuǎn)化效率降低，這點跟
大腸桿菌感受態(tài)制備過程不同,。
二：化學(xué)轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細胞
1. 將總體積不超過 20 uL 的 0.1-5 ug 質(zhì)粒 DNA 加到剛從-80℃冰箱取
出的,、還處于凝固狀態(tài)的 0.2 mL 酵母感受態(tài)細胞上。注意：zui同時
做一個不加質(zhì)粒 DNA 的陰性對照組,。
2. 室溫充分振蕩直到凝固的感受態(tài)細胞*融化,。注意：此步非常關(guān)鍵，
如果能在恒溫振蕩器上 37℃振蕩 5 分鐘,，則效果更好,。
3. 加入 1.4mL 轉(zhuǎn)化液 A,，輕柔顛倒混勻一分鐘,。
4. 30℃培養(yǎng) 1 小時。
5. 室溫 3000g 離心 5 分鐘,，棄上清,。
6. 在酵母細胞沉淀中加 1.0 mL 轉(zhuǎn)化液 B,，振蕩一分鐘,。
7. 室溫 3000g 離心 5 分鐘,，棄上清,。
8. 在酵母沉淀細胞中加入適量（如 100 uL）的轉(zhuǎn)化液 B，混勻后在在選
擇培養(yǎng)基上全部涂盤。
9. 30℃培養(yǎng) 3-5 天后即得酵母轉(zhuǎn)化菌落,。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞制備試劑盒,，裂殖酵母感受態(tài)細胞制備試劑盒,。