膜結合DNA清除試劑盒用于體外細菌內(nèi)毒素的檢測，禁止以任何途徑進入機體,。
 本試劑盒又稱鱟試劑,，為鱟科動物東方鱟的血液變形細胞溶解物的冷凍干燥品。 鱟試劑中含有Ｃ因子、Ｂ因子,、凝固酶原,、凝固蛋白原等。在適宜的條件下（溫度,，pH 值及無干擾物質）,，細菌內(nèi)毒素激活 C 因子，引起一系列酶促反應,，使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應形成凝膠,。
規(guī)格及成分 成 份 10 支包裝（小扁盒）
本產(chǎn)品，靈敏度 0.06 EU/mL 0.1 mL×10
膜結合DNA清除試劑盒使用手冊 1 份
運輸及保存 常溫運輸,，陰涼處避光保存,，有效期兩年。
自備試劑 細菌內(nèi)毒素工作標準品,、無內(nèi)毒素水,。
使用方法 一、樣品溶液的制備
樣品的 pH 值應在 6.0–8.0 之間,，若超出此范圍,，需用無熱原緩沖液或 0.1N 氫氧
化鈉、0.1N 鹽酸調(diào)節(jié),。若樣品中可能存在鱟實驗的干擾物質,，見本說明書 4.2“樣品的
干擾實驗”。若樣品中可能含有導致鱟試劑中 G 因子旁路反應的（1,3）β－D－葡聚糖,，
需選用不會對（1,3）β－D－葡聚糖起反應的特異性鱟試劑,。
二：細菌內(nèi)毒素標準溶液及對照液的準備
2.1 細菌內(nèi)毒素標準溶液 （本試劑盒不提供）
取細菌內(nèi)毒素工作標準品 1 支，按《細菌內(nèi)毒素工作標準品使用說明書》配制 2λ , 1λ ,
0.5λ,及 0.25λ的一系列內(nèi)毒素標準溶液 (λ為鱟試劑靈敏度標示值),。備用,。
注：鱟試劑靈敏度復核實驗見本手冊其他常用實驗方案。
2.2 陰性對照液：即無內(nèi)毒素水,。
2.3 陽性對照液：即濃度為 2λ的內(nèi)毒素標準溶液,。
2.4 樣品陽性對照液：即添加濃度為 2λ內(nèi)毒素標準的樣品溶液。
三：內(nèi)毒素檢測
3.1 鱟試劑的溶解：按標示量（本試劑盒為 0.1mL/支）加無內(nèi)毒素水于鱟試劑中,，輕輕
振搖使鱟試劑*溶解,。注意不要引起氣泡，溶解后的試劑應在 10 min 內(nèi)使用（即配即
用）,。
3.2 樣品溶液的制備
樣品zui大有效稀釋倍數(shù)（MVD）的計算：
 MVD＝ C·L/λ
λ：測試用鱟試劑靈敏度標示值(EU/mL),；L：樣品細菌內(nèi)毒素限值；C：樣品濃度或樣
品復溶后所得樣品濃度,。當 L 單位為 EU/mL（溶液）時,，C 的單位為 1mL/mL；當 L
單位為 EU/mg 或者 EU/U 時，C 的單位為 mg/mL 或者 U/mL,。
按照計算所得體積,，加無內(nèi)毒素水制備樣品溶液。
3.3 各反應管中分別加入 0.1mL 陰性對照液,，陽性對照液,，樣品，或樣品陽性對照液,。
封閉管口，輕輕搖勻,，垂直放入 37℃的恒溫器中溫育 60 分鐘±2 分鐘,，溫育期間避免振
動。
3.4 結果判斷
3.4.1 將試管從恒溫器中輕輕取出,，緩慢倒轉 180°,。若管內(nèi)的內(nèi)容物呈堅實凝膠，不
變形,，不從管壁滑脫為陽性,，記錄為（+）；不呈凝膠或雖生成凝膠但不能保持完整并從管
壁滑脫為陰性,，記錄為（－）,。
3.4.2 只有當陰性對照管結果均為陰性，陽性對照管,、樣品陽性對照管結果均為陽性,，實
驗方有效，否則無效,。若陰性對照管為陽性,，提示鱟試劑、無內(nèi)毒素水或實驗器具可能受
到污染,。若陽性對照管為陰性,，提示鱟試劑活性減失、內(nèi)毒素標準溶液效價降低,，鱟試劑
的靈敏度或內(nèi)毒素的效價標示不準確,，或內(nèi)毒素標準溶液的稀釋不正確。若樣品陽性對照
管為陰性,，提示反應體系內(nèi)有干擾因素存在,。
四 其他常用實驗方案
4. 1 鱟試劑靈敏度復核實驗
當使用新批號的鱟試劑或實驗條件發(fā)生了任何可能影響檢驗結果的改變時，應按《中華人
民共和國藥典》2010 版中《細菌內(nèi)毒素檢查法》的“鱟試劑靈敏度復核實驗”進行實驗,。
按照下式復核靈敏度：λ＝lg-1
(∑X/4),，當 0. 5λ≤λ ≤2.0λ 時，鱟試劑靈敏度復核合格，
檢測時仍以標示靈敏度 λ 為準,。
4.2 樣品的干擾實驗
當鱟試劑,、樣品的來源、配方,、生產(chǎn)工藝或實驗環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響實驗結果的
變化時,，須按《中華人民共和國藥典》2010 版中《細菌內(nèi)毒素檢查法》的“干擾實驗”
進行干擾實驗。
以樣品代替無內(nèi)毒素水為溶劑,，配制 2λ, λ, 0.5λ, 及 0.25λ 的內(nèi)毒素系列標準溶液進
行靈敏度復核,。若靈敏度復核值在 0.5λ 到 2λ之間(包含 0.5 λ及 2 λ)， 則認為在此
實驗條件下樣品無干擾,。若靈敏度復核值在 0.5λ 到 2λ之外,，則認為在此實驗條件下
樣品有干擾，需對樣品進行稀釋(稀釋倍數(shù)不得超過zui大有效稀釋倍數(shù) MVD)或進行其它
處理消除干擾,。
4.3 凝膠限度實驗
凝膠限度實驗用于判斷樣品的內(nèi)毒素含量是否超過藥典所規(guī)定的細菌內(nèi)毒素限值,。按《中
華人民共和國藥典》2010 版中《細菌內(nèi)毒素檢查法》的“凝膠限度實驗”進行實驗。
在實驗有效的情況下,，如果樣品管的兩個平行管均為陰性,，判定樣品的內(nèi)毒素含量小于藥
典規(guī)定限值。如果樣品管的兩個平行管均為陽性,，判定樣品的內(nèi)毒素含量不符合藥典規(guī)定,。
如果樣品管的兩個平行管一管為陽性，另一管為陰性,，需進行復試,。復試時，樣品需做 4
個平行管,，若所有平行管均為陰性,，判定樣品符合規(guī)定，否則判定樣品不符合規(guī)定,。
4.4 凝膠半定量實驗
本方法系通過確定反應終點濃度來量化樣品中內(nèi)毒素含量,。詳見《中華人民共和國藥典》
2010 版中《細菌內(nèi)毒素檢查法》的“凝膠半定量實驗”。
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